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ChIP免疫沉淀实验流程(两种方法)

发布时间:2022-12-15 10:37:47 阅读:11262次 来源:百度学术

  免疫沉淀实验流程目前主要有两种不同的ChIP实验方法:

  1.2 Cross-liking Chromatin Immunoprecitation (交联染色质免疫沉淀,X-ChIP)

  1.甲醛处理细胞,使 DNA-protein 的相互结合作用被交联固定。

  2.裂解细胞,得到全细胞裂解液。

  3.超声处理,将基因组 DNA 打断至 100-500bp。

  4.抗体免疫沉淀:在细胞裂解液中加入一抗和 beads,并进行孵育。

  5.采用合适的实验条件进行洗脱,并解交联。

  6.通过 qPCR 对 ChIP 结果进行验证。

  7.准备好的 ChIP 后的 DNA 样品可以用于 ChIP Sequencing 建库。

  1.1 Native Chromatin Immunoprecipitation (自然染色质免疫沉淀,N-ChIP)

  1.通过非变性的方式得到核裂解液。

  2.微球菌核酸酶(Micrococcal nuclease)消化染色质,得到单核小体或核小体寡聚体。

  3.抗体免疫沉淀:在细胞裂解液中前后加入一抗和 beads,并进行孵育。

  4. DNA 分离。

  5.通过 qPCR 对 ChIP 结果进行验证。

  6.准备好的 ChIP 后的 DNA 样品可以用于 ChIP Sequencing 建库。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/1883.html

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