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分子实验-分子诊断在兽医体外诊断的趋势(PCR带来的作用)

2021-12-27 10:35:25
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  作为一种在兽医诊断领域新兴的检测技术,PCR因其无可比拟的优势受到了越来越多的关注,也将会引领兽医体外诊断技术发展的潮流。本文系统性的阐述了分子诊断的优势以及目前困扰兽医师们常见的问题。相信通过本文的阐述,可以让兽医师们从一个专业、客观的角度重新认识PCR及其相关技术。

  体外诊断对于医疗决策至关重要,据统计,目前全球超过65%的医疗决策是基于诊断信息所作出的。

  体外诊断是指在生物体之外,通过对生物体样本(血液、体液、组织等)进行检测而获取临床诊断信息,进而判断疾病或机体功能的产品和服务。体外诊断产品主要由诊断设备(仪器)和诊断试剂构成。随着现代科学技术的进步,体外诊断技术得到了迅猛发展。

  以PCR为代表的分子诊断引领着体外诊断技术发展的第四次革命

  纵观体外诊断技术的发展经历了四次革命。化学技术的发展(如血液的常规生化检测)为体外诊断技术带来第一次革命性的进步,从此,实验室检查不仅仅是单纯的形态学观察和描述。

  体外诊断技术的第二次革命源于人类对“酶”的认识和酶学技术的发展。如临床上血清和尿液的淀粉酶、血清乳酸脱氢酶和天门冬氨酸转氨酶的临床检测等。

  免疫学的发展和免疫技术的应用为体外诊断技术带来了第三次革命。这种采用抗原-抗体结合原理建立的各种检测方法在临床上广泛应用,不仅用于检测各种肿瘤标记物、自身抗体,还可以用于检测感染性疾病标志物和激素等。

  分子诊断技术的迅猛发展无疑是体外诊断技术第四次革命,分子诊断主要是应用分子生物学方法检测生物体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出的诊断技术,可以从基因层次进行检测。

做实验

  目前,分子诊断技术以其具有的灵敏度高、特异性强、简便快速、可进行定性、定量检测等优势,已广泛应用于感染性疾病(包括细菌性感染、病毒性感染、寄生虫、真菌、人畜共患疾病等)、肿瘤等多个领域。分子诊断的检测结果对临床医疗决策的贡献度进一步提升,检验结果的重要性也达到空前的高度。

  以PCR为代表技术的是当前分子诊断最常用的简称方法。PCR技术是用一对寡聚DNA作为引物,通过变性-退火-延伸这一周期多次循环,使目的DNA得到扩增,具有高灵敏性和高特异性的优势。实时荧光定量PCR实现了PCR从定性到定量的质的飞跃

  实时荧光定量PCR技术(将荧光基团加入到PCR反应体系中,借助荧光信号,累积实时监测整个PCR的进程)不仅具有传统PCR的优势,还具有特异性强、灵敏度高、重复性好、反应速度快、定量准确和自动化程度高等特点,成为国际公认的核酸分子定量的标准方法。

  实时荧光定量PCR可以早期、精准的诊断宠物疾病

  在目前的宠物临床工作中,广泛存在着对一部分病原诊断困难或者不能精确诊断的问题。具体表现在以下几个方面:

  1. 现有的诊断技术灵敏度低,如:常见用于病毒诊断的胶体金试纸。虽然,胶体金试纸可以提供快速诊断,但是该种方法是从蛋白水平对病原进行检测,存在一定的交叉反应和动物自身抗体干扰,导致临床应用的过程中出现假阳性和假阴性的结果。

  2. 疾病的早期诊断(如潜伏期)和抗原要求较高的疾病,使用传统的诊断技术(胶体金试纸和ELISA检测方法)无法提供准确的诊断依据。如临床上常见犬瘟热和细小病毒;

  3. 临床上有很多的病原没有商品化的便捷的试剂商业化生产,这一部分的病原诊断(如猫传染性腹膜炎)目前在兽医临床工作中还不能做到在医院内诊断。如果需要做血涂片、粪检的疾病,导致主观性较强,易产生漏检的现象。

  4. 在疫病防治过程中,如注射疫苗是预防犬猫病毒性疾病的主要措施,但是血清学检测出的抗体很难区别是疫苗免疫还是病毒感染产生的,而PCR能够精准的检测病原体。

  5. 临床上还有一些病原在微量时存在诊断困难的情况,比如巴贝斯虫等疾病。因此PCR(尤其是实时荧光定量PCR)使这些疾病的精准诊断成为现实。

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