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荧光共定位的散点图解析(怎样精确定位一点的经纬度)

2022-03-25 10:53:16
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  荧光共定位定量分析的三大要点。

  ① 散点图

  ② 皮尔逊相关系数

  ③ 重叠系数(也称为共定位系数)

  皮尔逊相关系数和重叠系数其实是Image Pro Plus根据散点图进行回归分析计算得到的。

  因此,解读散点图成为重中之重,也是发表论文时必须报告出来的。

  ▼ 1.为什么要分析散点图?

  其实最开始定量分析共定位是采用划线法。

  IPP把人为划定的线条上的红色通道、绿色通道强度值转换为波形图(如下)。

图例

  很快,大家注意到这条人为划定的线不靠谱,线段的位置和长短不同,右侧的波形肯定也会变化。这种局部测量波形图给造假者留下了空间。  于是,散点图出现了。

  将整张图中所有荧光点纳入,分离为红色通道和绿色通道,然后根据两个通道的强度(也就是灰度)生成散点图,并计算相关系数。

  这样就造不了假,只要图片不变,散点分布是无法被人为操纵

  ▼ 2. 散点图有哪些信息?

  (2.1)如果蛋白A(红色通道)和蛋白B(绿色通道)存在一定的共定位关系,那么散点图中的散点分布会呈现3种形态

图例

  ● 形态1:

  总体呈棒槌状,基本线性分布,靠近Y轴(绿色通道)。

  说明:蛋白A和蛋白B存在一定的共定位关系,但蛋白A荧光强度高于蛋白B。

  

  

图例3

  ● 形态2:

  总体呈直棒形状,线性分布,对角分布。

  说明:蛋白A和蛋白B存在很强的共定位关系,且蛋白A荧光强度与蛋白B基本相当。

形态3

  ● 形态3:

  总体呈棒槌状,基本线性分布,靠近X轴(红色通道)。

  说明:蛋白A和蛋白B存在一定的共定位关系,但蛋白B荧光强度高于蛋白A。

  (2.2)如果蛋白A(红色通道)和蛋白B(绿色通道)的共定位关系很弱,那么散点图中的散点分布会呈现以下内凹形态,这。

图例

  (2.3)散点图中4代表的是共定位荧光图像中的背景荧光,该区域内散点越多,说明背景荧光越强,散点图中会呈现以下形态。

图例

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