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如何制备血清减量或无血清培养基(无血清培养液怎么配)

2022-03-22 10:29:20
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如何制备血清减量或无血清培养基(无血清培养液怎么配)

  材料

  基础营养培养基,如DMEM

  营养物质:无机盐,氨基酸,维生素

  微量元素

  添加剂:生长因子和激素,其他各种培养基成分(见表1)

  凭经验先选用特别适合某种细胞生长的培养基,减少未限定培养基成分的浓度,直至细胞增殖能力降低,但活力仍较高。

  进行各种营养成分的不同浓度影响细胞增殖的实验。将已知的对至少一种细胞增殖有影响的营养成分,按以下分组进行测定:

  a. 能源(葡萄糖和谷氨酰胺);b. 微量元素和电解质(Na+ 、Cl– 、K + 、Ca2 + 、Mg2+ Cu2+ 、Fe2+ 、Se 、H2P04–和HC03 –) ;c. 氨基酸(谷氨酰胺、胱氨酸、半胱氨酸、组氨酸) ;d. 维生素( 生物素、维生素B12 );e. 脂类和脂的前体物(油酸、亚油酸与脂肪酸结合的胆固醇-游离BSA; 与组分噙A连接的未限定脂类;低密度脂蛋白、乙醇胺或磷酸乙醇胺)。确定大多数限制因子的最适浓度范围,并且确定中心范围的浓度;重复生长实验,依次确定并优化每种限制因素。

  降低未限定的添加成分的浓度,重复优化步骤。继续优化营养成分,直到其缩减的浓度得不到补偿。

  优化培养基中的生长因子、激素、转运蛋白及黏附因子等添加物质,可以单独试验,或者与培养基营养成分联合应用试验。

  低浓度血清和无血清培养基成分a

图例

  a. 储存液需要过滤除菌,将粉末状的葡萄糖和谷氨酰胺(或冷冻的分装液需融化)加入到重组的粉末状培养基中。

  b. 条件培养基必须由研究者按照实验目的选择细胞自行配制。


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