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病理实验:固定、脱水、透明、浸蜡及包埋

2021-11-16 10:12:21
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  固定是病理制片中最为关键的一环,是对组织形态和免疫组织化学结果影响深远的程序。组织固定的好坏无法在后期制片过程中进行纠正,所以用什么固定,怎么固定需要我们在取材前就充分考虑。

  固定的目的

  固定的目的是使蛋白质等成分凝固,以保持组织和细胞更接近生活状态。在保持细胞结构形态良好的同时,使抗原定位在原有位置,防止细胞发生自溶,减少细胞内蛋白质、脂肪、糖等各种成分的弥散、破坏与丢失。

  固定剂的选择

  固定剂种类很多,但目前没有一种可以使所有细胞或者所有组织都达到最佳固定效果的固定剂。目前应用最广的是10%中性福尔马林和4%多聚甲醛。

  固定的注意事项

  1.取出的新鲜组织应迅速固定;

  2.固定液的体积要在样本的10-20倍之间,固定瓶尽量选取广口瓶;

  3.放入组织后因应立即摇晃固定瓶,避免组织粘附在瓶壁,影响固定液渗透;

  4.含有空气的肺组织与脂肪组织,固定时应用纱布、棉花打包或者覆盖在表面使脏器整体浸于固定液中;

  5.固定后制片前的组织要用流水充分清洗,避免福尔马林引起的色素沉积。

  接下来让我们一口气说说脱水、透明、浸蜡、包埋。

  脱水

  组织在固定之后内部仍含有大量水分,石蜡作为最后的包埋介质,而水不能与石蜡相互混合。所以先要利用乙醇作为脱水剂,将水从组织中完全置换出来。但是乙醇对组织有明显收缩作用,所以必须采用从高浓度到低浓度逐级升高的梯度乙醇来脱水。

  透明

  脱水完毕的组织块,常用二甲苯作为能与乙醇融合同时又能溶解石蜡的媒介剂,将乙醇从组织中置换出来,达到石蜡浸入组织的最终目的。此过程中,媒介剂进入组织内其光折射指数接近于细胞蛋白的折光指数,使整个组织变得透亮,此过程称为透明。

病理实验脱水、透明、浸蜡、包埋

  浸蜡

  组织经过脱水透明后,要在熔化的石蜡包埋剂里面浸渍,称为浸蜡。一般需经过2-3次浸蜡过程才能完成。

  包埋

  浸蜡后的组织块和熔化石蜡固定称为均一硬度易于切片的过程,即为包埋。

  病理实验注意事项

  1.脱水、透明、浸蜡、包埋中所有试剂需要记录使用次数和脱水组织块数量,定期更换;

  2.不同脏器组织脱水程序会有所不同,需经实验摸索得到适合的脱水程序;

  3.组织与包埋盒底部要贴平,使组织与蜡之间不留空隙;

  4.包埋时候应注意包埋方向。一般肝、肾、肿瘤等选择组织最大面进行包埋,但是对于一些需要分别观察横截面和纵截面的组织,需事先确定好观察方向。

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