做细胞生物学实验，细胞铺板大概是我们最常见的一个实验。但有时候铺得不是很均匀：要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。下面为大家分享几点经验。

　　1、尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶润洗一遍（25cm2培养瓶或6孔板），弃掉胰酶，37度消化2-3分钟或室温消化5min左右，镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够，延长消化时间。

　　2、96孔板一般以100 微升每孔接种，直接用100 微升移液器吸取细胞悬液，沿孔壁（稍离开一点孔底即可，不要离底太高）直接接入，移液器不需完全打到最大，轻轻按下即可，每铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约5分钟，放入37度培养箱。

　　3、6孔板、12孔板或24孔板，可采用将每个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底，然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔依此类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有96孔板好掌握，效果没有96孔板好。

　　4、培养瓶里面加好细胞以后(比如传代好/分好细胞以后)，先顺时针摇晃3次，马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。

　　贴壁细胞铺孔板均匀技巧分享

　　1、铺96孔板：

　　96孔板一般以100 微升每孔接种，直接用100 微升移液器吸取细胞悬液，沿孔壁（稍离开一点孔底即可，不要离底太高）直接接入，移液器不需完全打到最大，轻轻按下即可，没铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。

　　2、铺24孔板：

　　24孔板一般以500 微升每孔接种，用移液器吸取500微升细胞悬液沿孔壁一边用力吹入板底，使其铺满板底，静置5-10 min，避免晃动，轻轻移至培养箱，尤其在关培养箱门时，切记轻轻关上，不要让培养箱震动而导致细胞扎堆在中间。

　　3、铺6孔板：

　　6孔板一般以1 mL每孔接种，先在每孔预铺1 mL培养基，再用移液器吸取1 mL细胞悬液沿孔壁一边用力吹入板底，转移至培养前，顺时针或逆时针摇晃培养板数次再轻轻移至培养箱，在关培养箱门时一样要轻轻关上杜绝培养箱震动。