假期过早结束，又到了复苏细胞重新开始实验的时候了。以下是复苏细胞的一些注意事项:

　　1.细胞保存在温度为-196℃的液氮中。理论上，存储时间是无限的。只要放在液氮里保存，冷冻没有问题，回收也不会有大问题，没有保质期。可能发生的情况是，细胞保存的时间越长，世代可能越高。细胞冷冻复苏的基本原理是慢冻快融，复苏越快越好。实验证明，这样可以最大限度地保存细胞的活力。

　　2。取细胞时，采取防护措施，戴防冻手套和护目镜。液氮可能漏入细胞冻存管，解冻时冻存管内温度急剧上升，可能导致爆炸。

　　3.冷冻保存液必须在1-2分钟内完全融化。恢复温度太慢会造成细胞损伤。如果冻存管壁较厚，隔热效果较好，可适当提高水浴温度(37℃~40℃)。冻存推荐进口产品，如cell systems的原代细胞冻存液(货号:4Z0-705)，复苏时细胞存活率高，或上海达奇生物细胞保存冻存液(货号:SD0001)，DMSO含量5%，海藻糖、丙二醇、细胞生长因子，可增加细胞存活率。

　　4.提前预定超净台，减少恢复后在冰盒内的等待时间。如果恢复需要较长时间(>:1h)等待，建议在离心管中加入15ml以上的培养基，摇匀，以稀释DMSO对细胞的毒性作用。对于不经离心直接加入培养基的方法，培养基的用量是需要考虑的问题。主要涉及到DMSO的浓度。一般DMSO含量为5%的细胞在7.5ml完全培养基中不受影响，细胞可以正常生长(这一招效果很好)。

　　5.细胞裂解后是否需要离心取决于具体的细胞条件。主要有两种方式。一种是将解冻后的细胞悬液直接吹匀，然后包装在培养瓶中培养，第二天换液(贴壁后换液)。因为离心的目的是去除DMSO和死细胞，所以这是标准流程。但对于一般人来说，如果离心速度和时间把握不好，转速不够，活细胞就会沉到底，细胞就全被扔掉了。如果旋转的活细胞压力过大，就会死亡。另外，在操作过程中容易被污染。另一种是离心后清洗冷冻液，一定要清洗。悬浮并缓慢贴壁的细胞必须离心，如NCI-H716和LNCAP。

　　6.有些细胞在痊愈后一周才好转。不要耐心，不要换液，耐心等待，两周后再做决定。不复苏三四天，细胞没有任何动静，想到失败，把细胞全部倒掉。MLO-Y4就有这个问题。技术恢复后，对它的各种花哨优待只是没持续多久，然后大家就不想关注它了。放了一个多星期，爆满。