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细胞复苏的步骤(细胞复苏有哪些注意事项)

2022-06-12 10:48:54
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  假期过早结束,又到了复苏细胞重新开始实验的时候了。以下是复苏细胞的一些注意事项:

  1.细胞保存在温度为-196℃的液氮中。理论上,存储时间是无限的。只要放在液氮里保存,冷冻没有问题,回收也不会有大问题,没有保质期。可能发生的情况是,细胞保存的时间越长,世代可能越高。细胞冷冻复苏的基本原理是慢冻快融,复苏越快越好。实验证明,这样可以最大限度地保存细胞的活力。

  2。取细胞时,采取防护措施,戴防冻手套和护目镜。液氮可能漏入细胞冻存管,解冻时冻存管内温度急剧上升,可能导致爆炸。

  3.冷冻保存液必须在1-2分钟内完全融化。恢复温度太慢会造成细胞损伤。如果冻存管壁较厚,隔热效果较好,可适当提高水浴温度(37℃~40℃)。冻存推荐进口产品,如cell systems的原代细胞冻存液(货号:4Z0-705),复苏时细胞存活率高,或上海达奇生物细胞保存冻存液(货号:SD0001),DMSO含量5%,海藻糖、丙二醇、细胞生长因子,可增加细胞存活率。

  4.提前预定超净台,减少恢复后在冰盒内的等待时间。如果恢复需要较长时间(>:1h)等待,建议在离心管中加入15ml以上的培养基,摇匀,以稀释DMSO对细胞的毒性作用。对于不经离心直接加入培养基的方法,培养基的用量是需要考虑的问题。主要涉及到DMSO的浓度。一般DMSO含量为5%的细胞在7.5ml完全培养基中不受影响,细胞可以正常生长(这一招效果很好)。

  5.细胞裂解后是否需要离心取决于具体的细胞条件。主要有两种方式。一种是将解冻后的细胞悬液直接吹匀,然后包装在培养瓶中培养,第二天换液(贴壁后换液)。因为离心的目的是去除DMSO和死细胞,所以这是标准流程。但对于一般人来说,如果离心速度和时间把握不好,转速不够,活细胞就会沉到底,细胞就全被扔掉了。如果旋转的活细胞压力过大,就会死亡。另外,在操作过程中容易被污染。另一种是离心后清洗冷冻液,一定要清洗。悬浮并缓慢贴壁的细胞必须离心,如NCI-H716和LNCAP。

  6.有些细胞在痊愈后一周才好转。不要耐心,不要换液,耐心等待,两周后再做决定。不复苏三四天,细胞没有任何动静,想到失败,把细胞全部倒掉。MLO-Y4就有这个问题。技术恢复后,对它的各种花哨优待只是没持续多久,然后大家就不想关注它了。放了一个多星期,爆满。

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