一、细胞划痕实验Culture Insert方法操作步骤

　　1、准备细胞，培养液，culture lnsert。

　　2、如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500μm宽度的划痕。

　　3、每隔4-6小时拍照记录。

　　4、根据收集图片数据分析实验结果。

　　二、常规细胞划痕法操作步骤

　　实验器材：细胞培养板、marker笔、直尺、微升枪头、培养基、PBS

　　1、培养板划线

　　首先使用 marker 笔在 6 孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔 0.5~1cm 一道，横穿过孔。每孔至少穿过 5 条线。划线时注意线不要太粗 。

　　2、铺细胞

　　在孔中加入约 5×105 个细胞（不同的细胞数量有所不同，根据细胞的生长快慢调整），接种原则为过夜后融合率达到 100%。

　　3、细胞划线

　　第二天用枪头或者无菌牙签，垂直与细胞平面，沿着头一天划在平板背面的线在细胞层上进行划痕(不同孔之间最好使用同一只枪头或牙签)。

　　4、洗细胞

　　划痕完成后，使用无菌 PBS 洗细胞 3 次，洗去不贴壁的细胞，即划线时划线的细胞，是划线后留下的间隙清晰可见，然后更换新鲜无血清培养基。

　　5、细胞培养、观察

　　将细胞放入 37℃ 5% CO2培养箱，培养。然后在适当的时间点，如 0，6，12，24h 取出细胞，显微镜线观察并测量划痕的宽度，并拍照(具体时间依实验需要而定)。

　　6、结果分析

　　使用 Image J 软件打开图片后，随机划取 6 至8 条水平线，计算细胞间距离的均值。

　　注意：保持实验环境的无菌性；选择适当的细胞贴壁；采用无血清培养液