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细胞划痕实验操作详细步骤

2023-06-13 10:25:49
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  一、细胞划痕实验Culture Insert方法操作步骤

  1、准备细胞,培养液,culture lnsert。

  2、如图,将细胞接种于Dish中间的Insert,细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500μm宽度的划痕。

  3、每隔4-6小时拍照记录。

  4、根据收集图片数据分析实验结果。

图例

  二、常规细胞划痕法操作步骤

  实验器材:细胞培养板、marker笔、直尺、微升枪头、培养基、PBS

  1、培养板划线

  首先使用 marker 笔在 6 孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔 0.5~1cm 一道,横穿过孔。每孔至少穿过 5 条线。划线时注意线不要太粗 。

  2、铺细胞

  在孔中加入约 5×105 个细胞(不同的细胞数量有所不同,根据细胞的生长快慢调整),接种原则为过夜后融合率达到 100%。

  3、细胞划线

  第二天用枪头或者无菌牙签,垂直与细胞平面,沿着头一天划在平板背面的线在细胞层上进行划痕(不同孔之间最好使用同一只枪头或牙签)。

  4、洗细胞

  划痕完成后,使用无菌 PBS 洗细胞 3 次,洗去不贴壁的细胞,即划线时划线的细胞,是划线后留下的间隙清晰可见,然后更换新鲜无血清培养基。

  5、细胞培养、观察

  将细胞放入 37℃ 5% CO2培养箱,培养。然后在适当的时间点,如 0,6,12,24h 取出细胞,显微镜线观察并测量划痕的宽度,并拍照(具体时间依实验需要而定)。

  6、结果分析

  使用 Image J 软件打开图片后,随机划取 6 至8 条水平线,计算细胞间距离的均值。

  注意:保持实验环境的无菌性;选择适当的细胞贴壁;采用无血清培养液


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