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细胞换液方式有哪些

2023-05-29 10:36:56
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  细胞换液是指去除旧的培养基,换成新的完全培养基以继续提供细胞充足的营养支持。当旧培养基 ph 值改变(含酚红的培养基通常是变酸发黄)时,需要及时进行换液。在培养细胞的过程中,换液是一项非常常规操作,它主要是为了清除细胞在生长过程中产生的各种代谢废物,补充新鲜的培养基,促进细胞生长。细胞换液主要有全换液和半换液两种方式,那么,不同方式的换液方法如何更换细胞培养瓶内的溶液呢?

  换液前工作准备

  环境准备:相对密封、防尘、防菌的无菌室

  操作者准备:双手清洁呈可操作状态

  物品准备:超净工作台、CO2培养箱、装有75%医用消毒酒精的酒精喷壶、PBS缓冲液、含血清培养基、巴氏吸管、移液器、废液缸。

  工作准备:预热完全培养基,酒精棉擦拭培养基瓶外表面后移入生物安全柜/超净工作台。

  细胞培养箱中取出的细胞,酒精棉擦拭培养瓶/皿外表面,移入生物安全柜/超净工作台。可以稍等待,待生物安全柜中的循环风将试剂瓶和培养瓶的外表面吹拂几分钟后,拧开培养基瓶盖虚掩,拧开培养瓶瓶盖虚掩,培养皿盖不用拧。

  第一种方式:细胞全换液

  如果是贴壁细胞,可以用全量换液法,直接吸去全部旧培养基,补充足量新鲜完全培养基。

  细胞全换液具体步骤

  1.将器材放入超净台,打开紫外照射灭菌,若是培养的细胞对温度比较敏感,可以将含血清的培养基瓶放入37℃的水浴箱使得培养基温度在37℃,再转移到超净台紫外灭菌。另外,细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。

  2.从培养箱取出细胞培养瓶,用酒精喷壶在瓶子表面喷洒75%酒精消毒,转移到超净台,打开盖子,轻轻吸出旧的培养液,可用移液器加入新鲜含血清培养基,注意一定不要从细胞贴壁面加入培养基,应从侧壁加,动作轻柔,以免冲落细胞。

  3.加好培养基后,盖上盖子,在瓶子上做标记,注明换液时间,细胞种类,操作人员等信息。

  4.放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷瓶子表面,然后应记得整理操作台,用酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。

  第二种方式:细胞半换液

  “细胞半换液”又称“细胞半量换液”,即弃掉一半旧的培养基,再加一半新的进去。选它的原因其实与前面不加PBS的理由有点相近。

  半换液原因

  1.给细胞提供适应的缓冲环境;

  2.细胞生长过程中可能会分泌某些生长因子,促进生长;

  3.节省材料

  4.方便操作:比如96孔板,换液很麻烦。所以常采用排枪进行半换液;

  5.对于悬浮细胞的培养,有时也会选用半换液减低细胞密度;

  细胞半换液操作步骤

  如果是悬浮细胞,可以用半量换液法。

  1.即吸去一半旧培养基

  2.补充新鲜完全培养基(会损失一半细胞)。

  悬浮细胞如果不想损失细胞,那就需要将培养物转移到离心管中,离心去除旧培养基,再用新培养基重悬细胞沉淀。

  细胞换液常见问题

  1.细胞换液是否需要用PBS清洗?

  我们知道,在“贴壁细胞传代”中,培养基中的血清会抑制胰酶的活性,影响消化的效果,所以必须要PBS 的清洗。

  但对于细胞换液,尚未查到有资料明确说明是否需要PBS清洗。

  这里应该根据细胞的具体情况考虑

  a.若细胞比较“娇气”或生长状态不是特别好时,建议还是不要用PBS清洗。一方面,细胞贴壁的状态可能不是很牢固,PBS的冲洗会破坏细胞的贴壁状态;另一方面,PBS可能会洗掉细胞分泌的一些生长因子,这同样不利于细胞状态的调整。如果一定要洗,可以缓慢清洗,减少对细胞的伤害

  b.当细胞生长状态不错,或者显微镜下观察细胞液中不是很干净时,可以选择用PBS清洗。一方面可以去除积累的代谢物;另一方面,也可将一些生长状态不好或衰老的细胞洗脱下来,保持细胞活力。

  细胞换液注意事项

  1.在进行换液操作时,全程注意无菌,操作人员要穿好灭菌服,戴好灭菌手套和口罩,手接触到细胞培养瓶瓶口时一定要小心,避免造成污染。

  2.加培养液时,不可直接加到细胞贴壁的面上。

  3.换液前记得观察细胞的状态及拍照记录

  不光细胞维持培养时需要进行细胞换液,一些实验操作也需要进行细胞换液。当换液操作是实验需要时,可能在添加新的培养基前需要 PBS 清洗细胞以去除旧培养基的影响, 新添加的培养基也可根据实验需求进行特殊配制,不一定是完全培养基。

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