细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中细胞不再形成组织（动物）。培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。

　　一、细胞复苏

　　将冻存细2113胞从液氮5261中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融4102化。移人15ml离心管中，加入10ml预热1653的DMEM完，全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。

　　加入10mlDMEM培养基清洗，弃上清液。加入10mlDMEM完，全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

　　二、细胞传代

　　细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1mlDMEM完，全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

　　加入10mlPBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10mlPBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

　　三、细胞冻存

　　细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完，全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10mlPBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

　　加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保，证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

　　冻存液的配制：70%的完，全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。