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转染实验可以加血清?血清都有哪些参数?

发布时间:2022-03-14 10:22:18 阅读:15182次 来源:百度学术

  血清主要参数

  血清可以提供细胞生长所必需的生长因子和营养元素,某些细胞特别是转化后的细胞,对于血清的需要量是很低的,在0.5 %左右。有些细胞被“培养成“只生存在低血清浓度的培养基中。由于细胞生长所需的物质已经被完全定性,所以更多的细胞是被培养在添加有特定物质的基础培养基中。如果细胞能够生存在不添加血清的培养基中则是一种比较幸运的情况。

  使用血清的时候有一些参数要注意:

  血清的浓度 大多数细胞的适宜浓度为5% ~ 20% 。

  血清的种类 有些细胞偏爱马的血清,组织细胞养的标准血清为小牛血清,而有些细胞则需要更贵的胎牛血清,还有些细胞(特别是人的)则需要最贵的同种生物血清。

  血清是否为热灭活血清 血清的某些成分遇热失活,比如补体。

  能从哪里得到血清 由于特定的细胞只能使用特定的血清,使用之前要先向实验室的人员或正在培养细胞的人员询问。虽然不同的公司价格不同,但是血清的选择标准不应该是省钱。

  热灭活血清

  把冻存的血清在室温条件下融化,如果是500 ml 体积可能要5~6h。融化后的血清在65℃保温30 min 后分装。分装时要根据血清的浓度和培养基所需要的量,分装后要冻存,使用时再把冻存的溶液放入37℃水浴中融解。

  普通转染实验为什么不能加血清

  血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基,转染后4-6h在更换成有血清培养基,这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性。这样不同的细胞及转染试剂要求转染的条件是不同的。最好是在第一次实验前做一个预实验,比如:HeLa,293,CHO,COS7, MCF-7,HepG2等细胞,是否加血清,对不同的细胞是有不同的影响的,有些细胞是可以有血清的,有些加血清就会受影响。所以,普通的转染试剂一定要进行预实验,和条件优化。

  转染后在6小时左右最好换液且换为有血清的培养基,其一因为普通转染试剂对细胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的细胞的死亡。转染时不加血清是防止血清的干扰作用,转染后可适时加入。加入过早会引起未转染细胞的优势生长,过晚会引起较多细胞死亡。可实时观察1/5细胞变圆的时候加入血清。

  相对来说,EntransterTM只浓缩包裹核酸不会将血清带入细胞,其内毒素和细胞毒性都非常之低,加上转染复合物能够高效的在完全培养基中形成,因而整个转染过程可以在含血清而且是含有抗生素的培养基中操作,不用在有血清和无血清之间更换,增加工作量,同时有血清转染不仅不造成细胞毒性,而且由于血清的存在,有利于细胞的状态维护,提高转染效率。

  细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小。这会对相关研究数据产生严重的干扰,甚至影响研究的结论。因此,选择一种毒性较小的转染试剂是细胞转染成功的关键因素之一。

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