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流式细胞术检测细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI 双染法)

2023-05-16 10:33:30
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  流式细胞术检测细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI 双染法)

  一、原理

  1、Annexin V-FITC

  在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞早期凋亡的发生。

  2、PI

  碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

图例

  3、总结

  因此,将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

  二、结果分析

  在二维散点图上,Annexin V是X轴,PI是Y轴,十字门将图片分为四个象限。X轴及Y轴的数值表示的是荧光信号强度或散射光信号相对强度,因此可以将其染色划分为阳性和阴性。其中根据Annexin V染色分为左右两部分,右侧(Q2/3)为Annexin V染色阳性;根据PI染色分为上下两部分,上方(Q1/2)为PI染色阳性。一般认为Annexin V单染的细胞是凋亡早期的细胞,PI单染的细胞是已经死亡的细胞,而双染是凋亡中期的。

  左上象限Q1:(Annexin V-FITC)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。

  右上象限Q2:(Annexin V-FITC)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞。

  右下象限Q3:(Annexin V-FITC)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。

  左下象限Q4:(Annexin V-FITC)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

  细胞凋亡率:Q2与Q3象限百分率的和。


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