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石蜡包埋固定及HE染色过程

2023-05-05 10:36:11
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  以下分析的是石蜡包埋固定及HE染色过程:

  1、取材与固定

  从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0、5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或**的分解,从而保持细胞本来的形态结构。

  2、脱水透明

  一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋。

  3、浸蜡包埋

  将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温。待石蜡浸入组织块后进行包埋:先制备好容器(如折叠一小纸盒),倒入已溶化的石蜡,迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片。

  4、切片与贴片

  将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为4~6微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平(54℃),再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干。

  5、脱蜡染色

  常用的染色法是苏木素和伊红染色(简称HE染色),以增加组织细胞结构各部分的色彩差异,利于观察。苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。对碱性染料和酸性染料亲和力都不强的物质,称为中性物质。细胞内被染成蓝色、红色和呈淡色的颗粒分别称为嗜碱性颗粒、嗜酸性颗粒和中性颗粒。染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,后入蒸馏水,就可染色。

  HE染色过程是:

  ①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

  ②酸水及氨水中分色,各数秒钟。

  ③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

  ④入70%和90%酒精中脱水各10分钟。

  ⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

  6、脱水透明:

  染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。

  7、封固:

  将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固。待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就可使用。我们在切片中所观察到的标本,是将器官或组织用切片机切成薄片并粘贴在载玻片上,经过染色等步骤制作而成。

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