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冻存、复苏细胞的办法和注意事项

2023-04-24 10:26:56
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  冻存、复苏细胞的办法和注意事项之细胞冻存:

  1. 时机不会:

  细胞状况不好(长的太过了,培养液现已很黄;细胞可疑污染;细胞已经开始凋亡或崩解;连续培养超越二个月,细胞性状已有改动改动)

  佳机遇:细胞增殖旺盛,状况安稳,实验作用杰出,复苏后两周内

  2. 细胞太少:

  冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。(复苏很难成功)

  离心后调整细胞浓度。(不要从头洗细胞)

  3. 盖子不紧:

  冻存管的盖子要拧紧,不然复苏水浴时会渗水,构成污染。

  挑选原配的管子和盖子

  4. 单薄的冻存盒:

  放在-80度的冻存盒,壁太薄,细胞在被迅速降温。

  挑选厚壁泡沫塑料盒,或塞入很多干棉花。(冻存的原则:缓降!)

  5. -80度太久:

  放在-80度冰箱的时刻超越半年。(冰箱的温度难以恒定:开门/关门,电压不稳等)

  赶快转入液氮。

  6. 液氮缺乏:

  液面不能漫过一切细胞。

  定期丈量液氮储藏,细胞悉数浸在液面下。

  7. 取错细胞:

  找不到/拿错冻存管。

  每支冻存管都标上细胞的称号,冻存时刻,并记载在册本来,只需冻存作业完成的好,复苏大多没有艰难,可是要有耐性。

  冻存、复苏细胞的办法和注意事项之复苏细胞:

  1. 取错细胞:

  拿错冻存管。(快快快,匆忙当中,难免犯错,何况-170多度,冻手!)

  核对记载册及冻存管上细胞的称号、时刻是不是共同。

  拿细胞时戴手套!

  2. 水浴时刻太长:

  2min还没消融。(冻存管的壁较厚,隔热)

  恰当进步水浴温度(37度-40度)

  要是冬季,就选用保温盒。

  3. 冰盒内时刻太长:

  复苏1h后,还没有加入新的培养液。(高浓度DMSO避免胞内构成冰晶,冻存时维护细胞,但复苏融解后,浸泡时刻太久会,对细胞有毒性)

  提早预定超净台,削减复苏后插在冰盒里等候的时刻。

  4. 失掉耐性:

  复苏三四天后,细胞没有动静,以为失败,倒掉一切细胞。(有些细胞复苏后一星期,才有起色)

  不要换液,耐性等候,两周后再做决议。

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