冻存、复苏细胞的办法和注意事项之细胞冻存：

　　1. 时机不会：

　　细胞状况不好（长的太过了，培养液现已很黄；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超越二个月，细胞性状已有改动改动）

　　佳机遇：细胞增殖旺盛，状况安稳，实验作用杰出，复苏后两周内

　　2. 细胞太少：

　　冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）

　　离心后调整细胞浓度。（不要从头洗细胞）

　　3. 盖子不紧：

　　冻存管的盖子要拧紧，不然复苏水浴时会渗水，构成污染。

　　挑选原配的管子和盖子

　　4. 单薄的冻存盒：

　　放在－80度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温。

　　挑选厚壁泡沫塑料盒，或塞入很多干棉花。（冻存的原则：缓降！）

　　5. -80度太久：

　　放在－80度冰箱的时刻超越半年。（冰箱的温度难以恒定:开门/关门，电压不稳等）

　　赶快转入液氮。

　　6. 液氮缺乏：

　　液面不能漫过一切细胞。

　　定期丈量液氮储藏，细胞悉数浸在液面下。

　　7. 取错细胞：

　　找不到/拿错冻存管。

　　每支冻存管都标上细胞的称号，冻存时刻，并记载在册本来，只需冻存作业完成的好，复苏大多没有艰难，可是要有耐性。

　　冻存、复苏细胞的办法和注意事项之复苏细胞：

　　1. 取错细胞：

　　拿错冻存管。（快快快，匆忙当中，难免犯错，何况－170多度，冻手！）

　　核对记载册及冻存管上细胞的称号、时刻是不是共同。

　　拿细胞时戴手套！

　　2. 水浴时刻太长：

　　2min还没消融。（冻存管的壁较厚，隔热）

　　恰当进步水浴温度（37度－40度）

　　要是冬季，就选用保温盒。

　　3. 冰盒内时刻太长：

　　复苏1h后，还没有加入新的培养液。（高浓度DMSO避免胞内构成冰晶，冻存时维护细胞，但复苏融解后，浸泡时刻太久会，对细胞有毒性）

　　提早预定超净台，削减复苏后插在冰盒里等候的时刻。

　　4. 失掉耐性：

　　复苏三四天后，细胞没有动静，以为失败，倒掉一切细胞。（有些细胞复苏后一星期，才有起色）

　　不要换液，耐性等候，两周后再做决议。