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肿瘤动物模型的构建方法,肿瘤细胞移植时要做哪些步骤

2023-03-01 10:38:48
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  对于大部分科研人员来说,说起做动物实验,做的较多的肯定是肿瘤动物模型的构建,而常见的肿瘤动物模型的构建,而这肿瘤动物模型的构建一般又包括了小鼠移植瘤模型和转基因动物模型。

  众所周知,小鼠移植瘤模型因为移植方式不同,又分为皮下种植移植瘤、肾被膜下种植移植瘤和原位种植移植瘤三种,本文重点说下大家更为关注的皮下种植移植瘤相关问题。

  动物实验中的皮下移植瘤模型,是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下,有经验的实验人员选择种植点位,一般会是选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝处。

  肿瘤细胞移植时的简要步骤:

  1、首先准备好要移植的肿瘤细胞,细胞量根据不同肿瘤略有不同;

  2、戴无菌手套后,将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤,然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际,将其腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次后,再将持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器45 度斜角进针,注意不要突破腹膜,将针头保持于皮下位置;

  3、然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下,将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下,快速退针,左手食指轻压针孔约 1 min 后将小鼠放回饲养笼中,注意将小鼠侧放于垫料上,放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。,2~3 h 后观察小鼠是否苏醒;

  4、如果是利用肿瘤组织(人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代)建立裸鼠皮下移植瘤模型,则需要首先将肿瘤组织用无菌 PBS(或 1640 培养基)洗涤 3 次,然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块(种植前可裹基质胶)备用。

  5、将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上,四肢用胶带固定,将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次,然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口,小镊子将皮下筋膜与皮肤分开,然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部,每个位置放置 2~3 块肿瘤组织,注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。

  6、然后缝合皮肤,消毒后将小鼠侧卧位放置于饲养笼的垫料上,2~3 h 后观察小鼠是否苏醒。

  动物实验中影响皮下移植瘤肿瘤形成的因素,主要有以下4种:

  1、移植肿瘤细胞的生长状态不理想:肿瘤细胞应选取传代后汇合度达 60%~80% 为最理想状态,此时细胞生长进入对数期,生长速度最快,状态最为理想,易于形成移植瘤。

  2、肿瘤细胞收集后种植到小鼠皮下时间过长:肿瘤细胞收集后应尽快种植到小鼠体内,一般在 2 h 内完成。

  3、 肿瘤细胞未裹有基质胶:裹有基质胶的肿瘤细胞种植比单纯的肿瘤细胞种植更易成瘤。

  4、肿瘤组织移植种植时肿瘤组织切块过大或者过小:过小或过大均不利于肿瘤形成。

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