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细胞株构建实验影响因素有哪些(稳定细胞株构建注意事项)

2023-01-15 10:35:39
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  对于需要往动物体内注射表达有外源片段的细胞需要构建稳定细胞株,以防止注射入动物体内后,很快外源片段表达丢失。此外,细胞个体差异(同一类细胞,不同个体细胞基因组存在差异)对实验结果有干扰,需要构建单克隆细胞株去除干扰。

  由于细胞个体差异对实验结果有影响。体外培养非原代细胞,多为转化细胞系或者癌细胞,细胞个体差异大,瞬时转染或者使用腺病毒/腺相关病毒载体进行转导更可以反映细胞群体行为。或者使用逆转录病毒载体构建混合稳定株。

  细胞株构建实验需要注意哪些因素?

  1.外源插入片段的拷贝数。多数情况下,低拷贝甚至是单拷贝可以减少人为实验因素的干扰。

  2.整合的几率,这不仅决定了稳定株筛选的难易程度,而且还可以帮助人们更容易得到混合稳定株。

  3.整合位点的转录活跃度,决定了稳定株中外源片段的表达质量。理想的状况是单拷贝,但转录活性比较高。

  4.整合后的稳定性。不同的整合位点决定了外源片段在染色体中的稳定性,有些区域易发生重组或者丢失,从而导致稳定株再次丢失的情况。

  5.使用混合稳定株或者获得多个不同单克隆稳定株。因为稳定整合往往伴随这插入失活宿主内源基因,所以实验时通过使用混合稳定株,或者对多个单克隆稳定株进行比较,可以帮助研究人员获得更精确的实验数据。


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