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流式细胞术的临床应用

2023-01-12 10:36:57
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  流式细胞术是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其它生物粒子进行多参数、快速的定量分析。每秒可以高速分析几万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术。是一门综合了光学、电子学、流体力学、细胞化学、免疫学、激光、计算机等多门学科和技术的高精尖技术,是一艘现代化标准中型“航母”。

  1、FCM在淋巴细胞亚群分析中的应用

  FCM利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合,再配合多色荧光染料,同时检测一种或几种淋巴细胞的表面抗原,从而将不同功能的淋巴细胞区分开来,并且得到各亚群的相对比例。最常检测的淋巴细胞亚群包括CD3^+CD4^+T细胞、CD3^+CD8^+T细胞、B淋巴细胞(CD19^+)及NK细胞(CD16^+CD56^+)等。通过对不同亚群淋巴细胞相对计数、绝对计数以及比率的观察,可以监测感染性疾病、免疫性疾病及肿瘤等疾病状态下机体的免疫状况,从而辅助诊断、判断病情变化,是目前各医疗单位开展和应用最广泛的项目。

  2、FCM在白血病/淋巴瘤中的应用

  白血病/淋巴瘤免疫学分型是利用单克隆抗体(McAb)检测白血病/淋巴瘤细胞的细胞膜和细胞浆抗原,分析其表型,以了解被测白血病/淋巴瘤细胞所属细胞系列及其分化程度。对白血病细胞抗原的分析研究有助于对白血病/淋巴瘤分型,为诊断和治疗提供依据。白血病/淋巴瘤免疫分型是形态学分型的重要补充和进一步深化,国际MICM分型协作组认为每一例急性白血病/淋巴瘤免疫分型都是必不可少的。白血病/淋巴瘤免疫分型对鉴别急性淋巴细胞白血病和急性髓性白血病有决定作用,对鉴别急性髓性白血病的某些亚型如M7、M3也有决定作用,对于一些用形态学、细胞组织化学不能诊断的急性白血病,急性未分化白血病,混杂性白血病等有重要意义。是目前被广泛接受和认可的免疫学分型方法。FCM的细胞免疫分型是国际MICM分型协作组公认的诊断造血细胞疾病必不可少的重要标准之一,是被列入国际及国内诊断指南的方法。

  3、FCM检测HLA-B27抗原

  HLA-B27基因是脊柱关节病的易感基因,强直性脊柱炎、反应性关节炎、炎症性肠病相关关节炎、银屑病关节炎、幼年脊柱关节炎以及未分化关节炎等疾病的发生与HLA-B27均存在不同程度的相关性。研究表明,强直性脊柱炎患者中,HLA-B27抗原阳性率高达91.1%。另外,HLA-B27尚与急性前葡萄膜炎的发生密切相关。FACS采用CD3/HLA-B27双标记抗体,首先鉴定出T淋巴细胞亚群,再分析其细胞表面是否存在HLA-B27组织抗原。检测HLA-B27可为上述疾病的诊断与鉴别诊断提供重要依据。

  4、FCM在肿瘤学中的应用

  FACS主要是对肿瘤细胞DNA进行分析以及对肿瘤相关标志物的检测。正常体细胞均具有较恒定的DNA二倍体含量,DNA二倍体含量改变以及DNA非整倍体细胞群出现,是细胞发生癌前病变或癌变的重要标志。通过对DNA进行染色标记,采用FACS检测分析,可以精确检测细胞DNA含量的改变,解析细胞周期,了解细胞的增殖能力,预测肿瘤的预后,指导化疗药物的选择,确定放疗强度、时间。通过对细胞DNA异倍体的监测,还可以为肿瘤的早期诊断及鉴别诊断提供参考。另外,FACS还可以检测分析肿瘤细胞的增殖活性标志分子、分化标志分子、凋亡标志分子以及免疫学标志物,用于肿瘤发病机制的研究、个性化治疗方案的制定以及预后判断等。

  5、FCM在造血干细胞移植的应用

  造血干/祖细胞移植已广泛应用于血液肿瘤、实体瘤、某些遗传性疾病、免疫缺陷病等,因此检测造血干/祖细胞已成为临床必不可少的手段。足够数量的造血干细胞是造血干细胞移植成功的关键因素之一,通过CD34标记和细胞计数微球同时使用,或者具有计数功能的流式细胞仪是鉴定和计数造血干细胞的快速、准确、定量的方法。

  6、血小板功能分析和血小板疾病诊断

  血小板膜上有丰富的糖蛋白受体,是血小板发挥其功能的物质基础,静止期和活化期血小板的膜糖蛋白受体的种类、含量、结构和功能显著不同,用不同的抗血小板单克隆抗体可测定和分析血小板功能状态。

  7、微小残留白血病检测

  微小残留白血病(MRL)是指白血病经治疗后获得完全缓解(CR)后体内残留少量白血病细胞的状态。微小残留白血病与常见白血病无明确界限,仅是白血病细胞负荷数量不同,一般成人常见白血病时白血病细胞可达1012,经治疗获CR后≤1010,,因此MRL状态白血病细胞数可能是10010。MRL是白血病复发的根源,因此检测MRL有十分重要的意义: ①指导临床治疗②预测白血病复发③评价自体骨髓移植的净化效果。

  8、FCM在临床微生物检测中的应用

  FACS快速、灵敏以及可以同时进行多参数分析的优点,使其在临床微生物检测中的作用受到越来越多的关注。通过荧光染料标记,不仅可以检测病原菌、毒素和血清抗体,还可用于抗生素敏感性试验,对抗生素后效应、细菌耐药的异质性等进行分析。流式微球分析(CBA)技术是FACS检测细菌病原体的常用方法,微生物抗原与被异性抗体包被的荧光微球结合,由于抗原的遮蔽效应,使荧光微球的发散光减弱,通过检测发散光强度的变化来进行诊断,应用不同大小的荧光微球,可同时检测同一标本的多个病原体,这种方法也可用于真菌、寄生虫、病毒以及这些病原体混合感染的检测。FACS体外抗生素药敏试验的主要机制是,通过FACS检测染料与病原体结合后发出不同荧光强度,间接反映病原体的活性和功能状态,进而帮助判断病原体对抗生素的反应性。

  9、FCM在细胞因子中的应用

  流式细胞仪也可检测细胞因子,细胞内细胞因子如白介素系列(IL-1—IL-14),肿瘤坏死因子(TNF),干扰素(IFN)等。


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