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流式细胞周期分析:DNA 染色及其他

发布时间:2022-04-27 10:32:18 阅读:11742次 来源:百度学术

  虽然您可以使用免疫荧光观察有丝分裂细胞周期进程,但流式细胞术是描绘仅通过染色体形态不明显的细节的好工具。DNA 染色是了解您的细胞在做什么的好方法。您还可以使用许多其他染色剂来更准确地指出您的群体中所代表的细胞周期的确切阶段。

  在这里,我将绘制可用于细胞周期分析的可用染色剂的图片。

  大局:用于细胞周期分析的 DNA 染色

  DNA 含量染色是将细胞分为 G 0 /G 1、S 和 G 2 /M 相的最简单方法。这种染色背后的原理是,在 G 2 /M中其 DNA 已加倍的细胞,其DNA 染色的荧光量是 G 0 /G 1中的两倍。相反,具有中等量DNA的细胞处于S期的DNA复制过程中。

  细胞周期分析最常用的染料是碘化丙啶 (PI),但这种染料也有一些缺点。PI 与所有双链核苷酸结合,因此您必须在样品中使用 RNase 来消除 RNA 信号。此外,为了让 PI 进入细胞并染色 DNA,您必须首先固定和透化您的细胞。不幸的是,这并不总是与其他荧光标记兼容。如果您有紫外激光,DAPI 是 DNA 特异性的,不需要 RNase,但仍需要透化才能获得细胞周期信息。

  如果您想从流式细胞仪中回收活细胞,或避免固定,请使用其他染料。您可以考虑的一些染色剂包括 Hoescht、7AAD、DRAQ5 和 DRAQ7,以及 Vybrant DyeCycle 染色剂,这些染色剂有多种颜色可供您在设计染色板时灵活使用。

  DNA 染色在细胞周期分析中存在一些局限性。如果您的细胞群中存在非整倍体,或者您的细胞正在死亡,您可能会收到高或低的信号,这可能会扭曲您的百分比。此外,DNA 染色不区分 G 0和 G 1或 G 2和 M 期。为此,请使用其他标记。

  更详细一点:其他标记

  有时您可能需要区分 G 0和 G 1中的细胞,仅通过 DNA 分析看起来相同。要分离这些群体,请将 DNA 分析与其他抗体染色相结合,以寻找特定的细胞周期标志物。以下是在这三种情况下要寻找的内容:

  G 0 /G 1:G 0细胞是静止的并且缺乏细胞周期机制。您可能需要将它们与能够进入细胞周期的G 1细胞分开。您可以利用 G0 缺乏细胞周期机制的优势:细胞周期蛋白 D1 或 E 的负染色将揭示哪些细胞已退出细胞周期。然而,这些标记并不完美,因为许多早期 G 1细胞可能还没有表达它们。或者,由于 G 0中的细胞处于静止状态且转录 RNA 的活性较低,您可以利用 Pyronin Y 染色来利用它们缺乏 RNA。通过比较 DNA 和 RNA 的染色,您可以分离出 G 0 /G中的细胞1 个低 RNA 含量的峰为 G 0。

  G 2 /M:G 2 /M 期细胞的 DNA 含量是正常细胞的两倍,但功能却大不相同。确定哪些细胞处于有丝分裂中的最常见标志物是磷酸化组蛋白 3 (pH3)。它在前期和末期之间的有丝分裂细胞中具有活性。您也可以使用 Cyclin A,它在晚期 S/G 2中表达,但在有丝分裂期间不存在。

  Early/Late S Phase:Cyclin A 用于区分G 2 /M,但也表示在S 后期。为了分离早期的 S 期,用 Cyclin E 染色。这种蛋白质在细胞进入 S 期时表达,但随着细胞通过 DNA 复制而减少。

  您需要所有都需要透化和固定的抗体染色剂才能观察这些标记物,因此在选择 DNA 染料配对时请记住这一点。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1095.html

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