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实验室的悬浮细胞如何培养

发布时间:2022-11-21 10:35:07 阅读:1272次 来源:生科云选

  悬浮细胞是指不需要依赖支持物,可在培养基中以悬浮状态生长的一类细胞,如淋巴细胞和大部分血液系统来源细胞。(如小鼠白血病细胞WEHI-3, 人白血病细胞K-562, HL-60)。工业上也有越来越多的贴壁传代细胞被驯化出来,进行全悬浮的培养。目前在工业中应用的主要有SP2/0、NS0、CHO、BHK和HEK293细胞等,它们主要用于重组蛋白质生产;在兽用生物制品中常用的传代细胞主要有采用全悬浮培养的BHK21细胞、MDCK细胞;及借助微载体悬浮培养的Vero细胞、PK细胞、ST细胞、 Marc145细胞等,每种细胞的特性都不同。

  一般情况下,悬浮细胞相较于贴壁细胞的处理更加简单一些,因为悬浮细胞传代时无须胰酶消化。但这并不意味着悬浮细胞比贴壁细胞好养,对新手来说,反而更具挑战性。总是会遇到各种各样的问题:比如,为什么总是出现死细胞和细胞分化;说好了传代很easy的,结果会出现分化;养好了冻存复苏后又出现问题了!

  接下来,我们一起探讨一下关于培养悬浮细胞的几个要点吧~

  要点一:足够耐心

  很多悬浮细胞在刚从冻存状态复苏时活力是相对较差的,此时我们需要有足够的耐心,等待细胞完成自我修复进入对数增长期。比如THP-1(人单核细胞白血病)从解冻到恢复正常增殖往往需要7-10天的恢复期;Jurkat,Clone E6-1(人T淋巴细胞白血病细胞)复苏后也需要5-7天才能恢复到冻存前的状态。新手可能会在此期间放弃培养,所以,请多一点耐心哦!培养这类细胞也是培养耐心的过程呢!

  要点二:把握接种密度

  一般来说,悬浮细胞接种时密度不应低于50万个/ML,很多悬浮细胞有密度依赖,密度低导致的不增殖也是新手常见问题之一。当然,有极少数细胞在密度高时反而状态变差,如W6/32(小鼠B细胞杂交瘤细胞)。

  要点三:换液方法及频率

  换液频率不应该被限制得“明明白白”,细胞是活物,在一个连续培养周期内,视细胞生长状态可分多次添加补充培养基、葡萄糖等特定营养成份,维持细胞良好的生长状态。悬浮培养过程中,随着细胞的增殖,原有培养基中营养物质的消耗,代谢产物的增加,细胞的活率会下降,及时补充营养物质,使细胞处于一个相对良好的生存环境。这里就不再赘述,切忌频繁离心换液。下面着重聊一聊换液方法:

  01.离心全换液法

  即通过离心(800-1000rpm,5min)去除全部旧的培养基,更换新鲜培养基。该方法适合“皮实“好养的悬浮细胞换液(如K562),或者当前细胞状态良好、密度较高导致培养基消耗较大的情况。此方法的优点是换液彻底,能去除部分细胞碎片,但是同样会对细胞造成一定程度的机械损伤。

  02.离心半换液法

  即通过离心(800-1000rpm,5min)50%细胞悬液,更换50%体积的新鲜培养基。该方法适合比较“矫情“难养的细胞(如thp-1),或者正在调整状态中、密度较低但碎片较多需要去除的情况。

  03.沉降换液法

  即不使用离心机而是利用重力自然沉降的方法,将培养基与细胞分离,达到全部或部分更换新鲜培养基。但是其有应用局限性—只适合能成一定大小细胞团(否则无法自然沉降,只能低速离心)的细胞,尤其是处理依赖细胞聚集才能增殖的细胞时非常值得推荐,如NK-92、NK-92 MI、Jurkat。该方法能在换液过程中最大限度避免离心过程造成的机械损伤,同时保留聚集的细胞团,并且去除细胞碎片也较为彻底。

  掌握了以上几点,再加上一株好的细胞种子,养出“漂亮“的悬浮细胞就指日可待啦!

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1799.html

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