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细胞为什么不贴壁

2022-11-21 10:43:21
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  一.体外培养细胞贴壁与什么有关

  首先并不是所有的细胞在体外培养的情况下都会贴壁,但大部分来自实体组织器官的细胞都会贴壁。

  二.贴壁的过程可能是这样的

  细胞首先分泌细胞外基质,这种细胞外基质黏附在支持物的表面(培养瓶,培养皿的底面)。然后,细胞通过其表面表达的黏附因子与这些细胞外基质结合。

  所以细胞贴壁与否和细胞本身分泌细胞外基质的能力以及细胞本身表达的黏附分子的数量有关,也与培养皿壁的表面结构有关。

  三.细胞为什么要贴壁

  细胞贴壁的过程使形态发生很大变化,细胞形态改变是细胞内骨架(是真核细胞中的蛋白纤维网架体系,由微管、微丝及中间纤维组成的体系)本身和细胞外基质共同作用的结果。

  密度大于培养基的细胞(绝大部分细胞)会沉降在底面上,那么细胞要生存必定得改善这个环境,分泌细胞外基质,改善底面的结构,然后很自然就贴附在底面上了。

  密度小于水的细胞,如脂肪细胞,漂浮在液面上,所以不可能贴在底面上,但是如果将培养液加满,那么细胞能够与培养瓶上面的壁接触同样可以贴壁。因此可以说,细胞贴壁是适应环境的一种反应。

  四.细胞不贴壁,可能是这些原因

  A: 细胞传代最重要的是胰酶处理时间:消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜损伤,使细胞贴壁不牢固,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡,漂浮细胞多等情况发生。

  B : 缺少贴壁因子:血清中含有促贴壁因子,而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子,细胞的贴壁效果会下降很多。

  C: 支原体、细菌、真菌的污染导致细胞背景脏等。

  D: 培养液配置、储存不当,如培养基开封过久,添加的因子析出、氨基酸分解等导致营养不充足。

  E: 复苏的细胞本身状态不好,已经老化,失去贴附性。

  F: 接种细胞数目太少,无法分泌足够的细胞外基质。

  G: 复苏时处理速度太慢,容易形成冰晶刺破细胞膜。

  五.如何促进贴壁效果

  最好用塑料瓶培养,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶,或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻,或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA,也可以帮助细胞贴附新的培养瓶,细胞不易贴壁,建议加多聚赖氨酸处理。

  1. 合适的消化液和优良的培养基是细胞贴壁生长的一个开始,配置好合适的培养基是一个很关键的元素。

  2. 使用合适的细胞外基质或贴壁试剂。

  3. 复苏新的细胞,初期提高血清浓度帮助细胞复原。

  4. 有的细胞传代接种一定要铺的均匀,使用画8字的方法,避免细胞抱团扎堆生长。

  5. 细胞传代24小时之内,最好不要晃动和观察细胞状态,以免影响贴壁。

  6. 体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜上,因此培养在有胶原的底物上有利于生长。

  六.多聚赖氨酸和牛纤连蛋白、明胶该怎么选

  对贴壁比较弱的细胞和原代培养时,经常会对用到的培养瓶/皿进行包被,那怎么包被让产品发挥它的价值呢?

  牛血浆纤维粘连蛋白:使用亲和色谱法提纯自牛血浆,是促进细胞贴壁和延伸生长的理想基质。它可与细胞细胞膜表面受体和细胞外基质结合是促进细胞贴壁和延伸生长的理想基质。推荐包被浓度为1-5ug/cm2是促进细胞贴壁和延伸生长的理想基质。37℃孵育1小时或4度冰箱过夜即可。

  多聚赖氨酸:是一种化合物,是带正电荷的氨基酸,通过改变培养基基地表面的电极来促进细胞贴壁。推荐使用2ug/cm2的浓度,37度孵育一个小时以上即可使用。

  0.2%的明胶溶液:明胶是来自于胶原的高分子水溶蛋白混合物。推荐用于分化的人胚胎干细胞以及某些原代和永生化细胞类型的培养。

  包被后养得更漂亮的细胞系:SHSY-5Y 、INS-1 、293 、Besa-2b 、GH3、原代复苏等。

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