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大鼠星型胶质细胞培养胰酶消化法

2022-11-16 10:39:44
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  材料与仪器

  SD大鼠

  苯巴(匕匕)妥 解剖液 胰蛋白酶 Dnase DM培养液

  离心管 培养箱 手术器材

  步骤

  一、 取14.5d SD大鼠一只。

  二、 苯巴(匕匕)妥0.5 ml 腹腔注射,待麻醉后置于手术台上,酒精棉球消毒皮肤,开腹取出子宫(约12-14个),放入解剖液中,剖开子宫,取出胚胎,放入解剖液中,在耳眼之间离断,取头侧部组织,去除脑膜组织,取原始中脑区组织,放入离心管装的解剖液中,待全部取出后,1500转2分钟。

  三、 用吸管吸出上清液,在组织细胞沉淀中加入胰蛋白酶一管(1 ml/vial),室温30分钟,1500转,离心5分钟(离心前可加入解剖液以终止胰酶作用)。

  四、吸去上清,在组织细胞沉淀中加入Dnase 一管(2 ml/vial),37℃反应10分钟,1500转,离心5分钟,吸去上清,在组织细胞沉淀中加入2 ml DM培养液吹打,计数(计数公式为(N1+N2+N3+N4)/4x104),以3x105个/瓶在培养瓶中培养,做好标记(时间、原代的还是第几代传代,姓名,细胞名称等),放入培养箱中培养。

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