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细胞培养常见问题及解答

2022-11-16 10:32:04
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  1.如何选用特殊细胞系培养基?

  培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首先选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。

  2.何时须更换培养基?

  视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上的更换时间,按时更换培养基即可。

  3.可否使用与原先培养条件不同的培养基?

  不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基,若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。

  4.可否使用与原先培养条件不同的血清种类?

  不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。

  5.何谓FBS, FCS, CS, HS ?

  FBS (fetal bovine serum)和FCS (fetal calf serum)是相同的意思,两者都是指胎牛血清,乃错误的使用字眼,请不要再使用。CS (calf serum)则是指小牛血清。HS (horseserum)则是指马血清。

  6.培养细胞时应使用5%或10% CO2?或根本没有影响?

  一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时,则应使用5% CO2培养细胞。

  7.Hank's平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用,不需要CO2培养箱。原因是什么?Hank's平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?

  HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中,溶液会变碱,Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagles液,如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks液就可以了。

  8.什么是细胞的接种密度?

  依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。

  9.悬浮性细胞应如何继代处理?

  一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。

  10.冷冻管应如何解冻?

  取出冷冻管后,须立即放入37℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。

  11.细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?

  除少数特别注明对DMSO敏感的细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15 ml新鲜培养基的培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。

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