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细胞成团了如何处理?怎么避免

发布时间:2022-11-08 10:16:10 阅读:11522次 来源:百度学术

  细胞成团的原因有哪些?

  1.消化的过程过于粗暴,吹打太用力,消化过久,消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团。

  2、细胞离心速度过大或时间太长,也容易造成细胞抱团。

  3、消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难。

  4、状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长得太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。

  5、传代时没有吹打均匀,细胞团多,培养时就会是一团一团的。

  6、非震荡培养或细菌(胞)量过多的话就会成团。

  如何避免细胞成团的现象?

  首先确认当前细胞生长密度及状态,80%左右的生长密度即可进行传代,此时细胞状态较好,且用于传代的数量也足够。

  传代操作前,使用缓冲液对细胞进行适当且全面地润洗,清除死亡的细胞团和部分堆叠杂质(在选择适当胰酶浓度时,对于不同代数的不同细胞系需进行一定的调整,如:部分贴壁牢固的细胞应将胰酶分装后,进行预热处理;细胞密度过高时,应该向胰酶中加入少量缓冲液,缓慢均匀地消化细胞等。对于贴壁格外牢固的细胞,可以尝试多次分批进行消化,最大限度保证细胞状态)。

  在消化过程中,需均匀慢速晃动培养器皿,以免局部胰酶浓度过高而影响传代。切勿用力摇动,导致边缘松动的大片细胞直接脱落,从而增加细胞成团几率。培养器皿的选择也需注意,部分实验室会使用玻璃培养瓶,因细胞贴壁在玻璃底更容易分离。同时玻璃材质的亲水性和塑料有区别,而且玻璃细胞培养瓶都是实验室内部处理,可能会有清洁残留,在一定程度上抑制细胞的贴壁生长,并且更容易消化,细胞之间的连接比贴壁还要紧密,聚团几率很大。

  另外,避免传代过程中汇合度较大,本身1:3甚至1:4都可以正常培养的细胞被1:2传代,会导致母代细胞浓度过高,在分化过程中出现堆叠现象

  适当的处理和设备使用,也可以减少成团。如果使用离心机分离或混合样品,将其设置为正确的速度可以减少聚团,通常情况下,较快的速度可以离心散细胞,但在高速下也必须考虑细胞的脆弱性。

  细胞成团了,如何处理?

  1.如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数时较麻烦。在消化时,可在细胞由多角形变成圆型之前,用手轻磕培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落(最好不要吹打,对细胞形状和生长都不好)。

  2.如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse()(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。

  3.如果细胞抱团是肉眼可见的,可让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,目前还没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。


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