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预防细胞培养污染有效方法

发布时间:2022-11-05 10:38:26 阅读:11462次 来源:百度学术

  无论新人还是熟手,细胞污染都是必须要面对的,那对于细胞污染,我觉得最好的措施就是预防为主,因为细胞一旦污染,想救是非常困难的,即便救活,细胞状态也会差很多。所以我先来说下我是怎么预防细胞污染的。

  生物安全柜是处理细胞的主要场所,也是细胞发生污染的主要场所,所以安全柜的正确使用是预防细胞污染的第一步。那么安全柜内需要注意的小细节有哪些呢?

  首先,所有进入安全柜的东西在进入前都要用75%的酒精消毒。特别要注意的是我们的手,只要出了安全柜,再进入安全柜前都要喷75%的酒精消毒。实验耗材尽量放置在合适的容器内用报纸包好后灭菌,如*头插入*头盒,其他不规则的耗材可放入铝制饭盒内。*头插入*头盒时要带手套,因为灭菌可能无法去除*头上可能粘附的油脂或其他杂质。

  其次,安全柜内的东西要摆放有序,这个可以根据个人使用习惯而定(如果站友使用的是公用安全柜,则可能需要使用前临时调整),以我为例,移液器和*头盒(各种规格备齐)放右边,实验中需要使用的试剂放右前方,废液缸放左前方,并保证和试剂有一定安全距离,右角放置培养皿,左角放置其他耗材(如试管等),尽量保证最常用的东西放右手边(左撇站友相反),次常用的东西放左手边(左撇站友相反),右边操作区域为洁净区,左边为非洁净区(如废液缸和其他用剩材料)。

  再次,由于使用安全柜的过程中手和前臂都是要进入安全柜的,所以有条件的站友应该准备至少一件细胞房专用连体洁净服(装入布袋消毒后烘干,在细胞房中取出,非更换前不得穿出细胞房),没有条件的站友则至少准备一副套袖,每次用完后放安全柜中紫外消毒。

  细胞培养离不开各种试剂和耗材,诸如培养基、血清、细胞皿/瓶等,所以预防细胞污染的第二步就是正确处理和使用这些试剂和耗材。如果实验室条件允许,那么最保险的莫过于直接都买商业化试剂和耗材,例如Gibco、Hyclone、ScienCell的试剂,Eppendorf、Corning的耗材等,这些品牌的试剂和耗材只要是正品,品质都没有问题。如果需要自己买干粉配制试剂,那么在试剂配制中的无菌操作也格外重要。另外建议每次试剂配制量不宜过多,比如培养基以1-2周内用完为宜,另分装成小瓶时可考虑再用针头滤器过滤一次,减少细菌污染的可能性。

  在准备工作一切就绪后,细胞的处理过程也是大家需要注意的。细胞处理前应将当次实验需要的各种试剂、耗材准备齐备,尽量减少细胞处理过程中的来回走动。安全柜使用前最好紫外照射30min灭菌,然后通风5min保证换气到位。实验过程中,所有试剂最好不用就盖上瓶盖,如果需要打开瓶盖,则除了干净的*头,其他任何东西都不要从瓶口的正上方经过,防止试剂污染。细胞培养若使用培养皿,则最好不要长时间打开皿盖。另外移液器也是细胞污染的一个隐藏途径,特别是使用无滤芯*头的站友,在吸取试剂时,很容易不小心将试剂倒吸入移液器,如果发生这种情况,要及时用酒精棉球擦去倒吸的试剂,特别是培养基,极易成为细菌生长的温床。一把污染的移液器可以轻松污染站友的所有细胞,甚至整个实验室的细胞,所以友情推荐有条件的站友在处理细胞时一定要使用带滤芯的*头。当然即便是使用带滤芯的*头,也要尽量避免试剂倒吸,因为想要彻底去除倒吸入移液器的试剂非常困难。

  培养箱作为细胞培养的场所,也需要站友留心。由于培养箱内的温度和湿度很高,是很适宜细菌生长的,所以如果有条件(实验室有2个或以上培养箱),最好定期用75%酒精擦拭培养箱,及时定期更换培养箱内水槽。

  那么细胞如果还是不幸污染了,那又该怎么办呢?我把细胞污染分为早期和晚期两种。早期污染是细胞状态变差,但依旧能保持生长,显微镜下(光镜)不可见明显微生物或可见少量微生物,这时候我们在换液时建议多用PBS洗几次,然后用双抗原液侵润细胞1-2min,吸去,再加入正常培养基。早期污染只要发现及时,处理得当,救回来的可能性还是很大的。晚期污染则是细胞形态发生明显改变,细胞停止生长,显微镜下可见明显微生物。这时候我建议大家及时清理掉相关细胞,以免污染其他细胞,重新复苏更早批次的细胞。所以大家会发现,新细胞收到后,不应急于开展实验,而应该先小心培养,冻存1到2个批次的早期细胞,然后再开展实验,这样实验细胞一旦出现问题,可以有库存细胞保证实验还能继续进行。

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