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细胞培养出现黑胶虫污染处理方法(应该怎么办)

发布时间:2022-10-26 10:23:49 阅读:1902次 来源:百度学术

  “黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代。如果在细胞培养时发现了“黑胶虫”该如何处理呢?

  01

  换好一点的血清,这样可以有效减少“小黑点”的形成。

  一般的血清都不要去灭活处理,因为经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。

  而经过热灭活的血清,沉淀物的形成会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。除非是在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,才推荐做热灭活。所以在不是做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞培养时,血清尽量不经热灭活。

  02

  如果是贴壁细胞的话,可用无菌的PBS洗几次,可一定程度上缓解。若是悬浮的话,就不太好处理了,可以向其中少加一点滋养细胞。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好,保持细胞间整个环境的洁净度。如果细胞不是非常珍贵,可以用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔,也有建议庆大霉素500ug/ml洗涤。

  03

  换用好的一次性塑料培养瓶。

  04

  停止复苏,停止养细胞,彻底消毒所有用于细胞培养的一切用品,包括所用的培养瓶,培养基,吸管,胰酶,孵箱,超净台、空间等等你能想到的和细胞培养相关的所有物品。一个星期后,再复苏污染之前冻存的细胞,注意你的白大衣衣袖污染即可。这样你可能觉得动作太大,但可以用一个星期的时间挽救两个月的时间,还有其他你为了找到污染源,去除污染所耗费的精力,和财力。

  05

  在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打,冲洗干净后再加入培养液,坚持天天洗,传代时加生理盐水再离心一次,接种密度稍大一些,一段时间后,虫子就会大大减少,对细胞的生长也不会有大的影响。所有东西最好重配;如果实在要抢救,重点突破,留几瓶污染不是很严重的细胞抢救,其余弃去。

  06

  如果有其它可用的细胞,那么被污染的细胞最好扔掉;如没有,可试着用抗生素,最可靠的是细菌培养加药敏,根据药敏结果选择抗生素,当然不能影响到细胞的状态。

  在细胞培养实验中,人们遇到的黒胶虫并不都是一样的,有像细菌的、有像支原体的、有像原虫的、有像真菌的,还有像细胞碎片的。在国内各实验室的器材条件参差不齐,而且实验人员的操作质量也不尽相同,同一种现象也可能有些许差异,当用描述出来的现象的差异可能变大也可能变小。

  所以很多人看到细胞被细菌污染了,不好处理,而且描述出来的现象和流传的黑胶虫类似,就会把培养失败的原因归结到无法处理的黒胶虫污染,甚至可能说它发现的是真正的黑胶虫。

  这样的事情多了,黑胶虫就会人为的变种,像什么的都有。黑胶虫是否存在,还有待于科学的发展。但有一点可以肯定的,大部分人发现的“黒胶虫”并不是真正那个未知的黒胶虫,而是不很常见的细菌、真菌、原虫等微生物污染。


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