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细胞不贴壁是什么原因导致的,如何促进细胞贴壁

2023-03-20 10:33:17
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  细胞不贴壁的一些原因

  1. 胰酶消化时间把控不当:消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜蛋白损伤,使细胞贴壁不紧,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡。

  2. 缺少贴壁因子:血清中含有促贴壁因子,而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子,细胞的贴壁效果会下降很多。

  3. 支原体或细菌的污染。

  4. 培养液配制、储存不当,如pH值过碱,Gln量太少等原因。

  5. 复苏的细胞本身状态不好,已经老化,失去贴附性。

  6. 接种细胞数目太少,无法分泌足够的细胞外基质。7. 复苏时处理速度太慢,复苏过程不当。

  如何促进细胞贴壁

  1. 适度消化细胞:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长,一般处理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落,2min足矣,P19Cl6和293细胞贴壁不紧,可在PBS漂洗后,直接换新鲜培养基打散。

  2. 最好用塑料瓶培养,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶,或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻,或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA,也可以帮助细胞贴附新的培养瓶,细胞不易贴壁,建议加多聚赖氨酸处理。

  3. 正确配制消化液或培养液。

  4. 使用合适的细胞外基质或贴壁试剂。

  5. 复苏新的细胞,第一周用20%血清帮助细胞复原。

  6. 传代接种一定要铺的均匀,避免细胞抱团生长。

  7. 细胞传代24小时之内,最好不要晃动,以免影响贴壁。

  8. 体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜上,因此培养在有胶原的底物上有利于生长。人或小鼠表皮细胞培养,可以用γ射线照射后的3T3细胞为饲养层,另外降低pH、Ca2+含量和温度,均有利于上皮细胞生长。

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