资讯动态

细胞培养实验流程及注意事项(细胞培养基本知识分享)

2022-10-20 10:46:00
|
访问量:123912

  一、无菌

  无菌的操作要**细胞培养中的头等大事,从培养基到操作过程再到培养箱,不管哪一环节忽视了无菌的原则,细胞的损失必将惨重,甚至有可能全军覆没。

  1.超净台

  超净台可以看做是一个微型的无菌室,做好维护工作,就能提供一个不错的无菌环境。在使用之前和之后,用70%-75%酒精棉,反复擦洗台面。如果超净台处于人流较大的环境。在开启超净台之前可在周围喷70%-75%酒精。除此之外,也可用紫外灯**:经常用的超净台开15分钟便可,不经常使用的超净台开半小时。

  2、酒精灯

  酒精灯的高温灼烧可以消灭大多数的微生物,在操作过程中,玻璃制具(如移液管,玻璃管、10 ml移液枪头等)都要注意在酒精灯上灼烧十多秒,等待冷却再使用。而对于塑料一类的材料(如瓶塞等),也要在酒精灯前面过一下。

  3、试剂

  细胞培养中所用到一切试剂(如培养液、生长因子、抗性试剂、筛选的**等),都有遭受微生物污染的可能性,而试剂染菌是很大一部分染菌现象的根源。因而,使用试剂前好验菌,哪怕是**产品,用前也要验菌,用完还需拿封口膜将其封口。另外,试剂在冰箱放久了,再次使用前也要验菌。在这些小细节上多花一些时间,便可换来我们的安心。

  4、个人卫生

  实验者的个人卫生情况对细胞培养成功与否也有很大的关系,比如隔离服、手套、口罩等清洁装备,可以防止自带的污染菌接触细胞。东西要进入超净台,可以用酒精棉擦拭以**。记住,要避免未经****的东西与细胞相接触!

  二、培养条件的品质

  上等的硬件设施、培养试剂和实验耗材很大程度上可以细胞培养的顺利进行,实验室如果有条件的话,所有的东西都尽量使用好的,比如:

  1.硬件设施:好的超净台和生物安全柜等。

  2.培养试剂:培养基、血清、胰酶、生长因子、抗性试剂、筛选的**等尽量使用进口产品;

  3.实验耗材:培养皿、移液枪、枪头等也尽量使用进口产品。

  三、操作习惯

  1.自己准备一套个人的实验器具,不要和别人混用。

  2.不管是买的细胞、还是惠赠的细胞,刚拿到手赶紧的做两件事:

  ① 检测是否有支原体污染;

  ② 迅速扩增冻存。

  3.发现细胞有污染的迹象就迅速处理掉:**污染和**污染很容易发现,而支原体污染后,细胞会长的慢,买个支原体检测的kit定期检测一下。

  4.别怕浪费,像枪头之类的实验耗材,只要有可能污染就立即更换。

  5.近换了什么新的东西稍微记一下,试剂一旦怀疑污染,马上丢。

  6.实验时所用材料的位置摆放要顺手,污染源和已**物品要分开放置。

  7.动作要快,胰酶消化,换液等,细胞暴露在空气中的时间越少越好。

  8.吹的时候,动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡,动作太轻就吹不下来。吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来,留一点,枪的头部尽量深的在液面以下。

  9.对于娇弱的细胞,要更细心呵护:胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间,每天都要去看一下细胞——肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。

  10.离开过操作台的东西再进操作台之前要用酒精喷一遍,包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。

  11.使用酒精灯时,别直接放到火上,离一段距离。

  12.身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方,比如实验台和培养箱内部等。

  13.实验结束后对实验台的**、和细胞房日常的值日清洁是的,此外还要定期熏蒸。

  14.培养箱隔一段时间用酒精棉擦洗一次。

  四.细胞传代、冻存和复苏

  细胞传代是细胞培养比较重要的一环,传代的好坏会影响细胞的生长状态(传代时机、传代时间长短、传代手法);而细胞冻存和复苏重要的就是慢冻速融。

  1.一般细胞汇合度达到70%就可以进行传代。如果想要细胞状态更好,可以在汇合度50%左右就进行传代。当然接种的时候也相应的减少数量,保持细胞生长周期在三天以上(传代太频繁,细胞状态很差)。

  2.传代时细胞数量不可以太稀,传的稀的细胞会长的特别慢;细胞密度也不能太大,到时候培养基营养不够,出现凋亡细胞。

  3.细胞的传代要规律,保持相同的频率和传代时间间隔,不要随心所欲或者拖延。

  4.有时间的话,需要细胞计数:传相应数目的细胞到培养皿中,可以大致清楚细胞的生长曲线,不会临时要处理,手足无措。

  5.不同细胞生长周期不同:有的生长很快(比如MDA-MB-231),传代时取离心悬液的十分之一就已经足够了;有的生长很慢(比如BT474),传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满,所以要在培养细胞的过程中多多摸索。

  6.细胞冻存前**习惯换液:通常是细胞传代两天后换液,然后第三天冻存细胞,主要是让细胞保持对数生长状态。

  7.冻存液:冻存液好现用现配。

  8.冻存盒:冻存盒用完好放在室温中。很多同学用完冻存盒后,直接将其放到-80℃,下次冻存细胞接着用。这时候冻存盒本身已经接近-80℃,里面的异丙醇已经不能起到缓慢降温的作用了。

  9.冻存细胞复苏后**天好更换一次培养基。

  10.每次开展相关实验的时候(**筛选等),铺板和冻存一起做,就是铺板的细胞同时冻存一批,如果实验结果不错,后期可以马上复苏出来重复实验。

  五、其他注意事项

  1.培养基的配制要做好梯度摸索并详细记录,否则细胞都不知道是怎么死的。

  2.细胞房不能进去太多人,避免相互干扰。

  3.尽量提高操作熟练度,减少培养皿在培养箱外的滞留时间,细胞很脆弱,经不起折腾。

  4.把握好培养基更换的时间,不同细胞类型时间不同,早了浪费试剂,晚了可能全军覆没。

  5.要做什么心里要非常清楚,合理安排时间,细胞房的实验穿**行,可以节省很多时间,也不会耽误别人的实验。

  6.养细胞大的教训:不能偷懒!


文章推荐
he实验操作步骤(苏木精-伊红染色法)
2022-10-31
苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining),简称he染色法,是···
保存培养基的方法有哪些
2022-08-16
培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制···
如何进行贴壁细胞和悬浮细胞的冻存与复苏
2023-05-21
为了防止因污染或技术原因使长,期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传···
精准医疗:肿瘤领域『伴随诊断』行业的思考!
2021-12-03
近几年,随着中国新药研发领域的竞争加剧,伴随诊断越来越多的受到研···
重大突破,IF12.1分!中科院亚热带所李凤娜团队在小鼠粪便中发现了预防结肠炎的有效物质!
2024-12-06
众所周知,我国肠炎发病率较高,通常是由感染、药物反应、食物不耐受···
组学都有哪些?这14种快速了解下!
2024-12-04
在生物医学领域中,有多个分支的组学,下面让我们一起来快速了解下以···
中科院1区IF10.6分!“外泌体+水凝胶”的国自然王炸组合,揭秘骨再生机制!不愧是顶刊思路,赶紧学习一波!
2024-12-02
众所周知,骨是人体重要的器官,承载着支撑运动,保护脏器等功能。在···
“铁积累+纤维化+细胞衰老”的王炸组合,不愧是Nature子刊的研究思路!轻松拿下中科院1区IF18.9分!
2024-11-29
“铁代谢”和“衰老”可以说是两个永不过时的研究热点,当然也是近几···
  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

在线留言(即刻联系为您提供专业的解决方案) ×
留言咨询

感谢您的关注,如有需要请留言,我们会尽快和您联系!