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细胞粘附实验方法

2022-10-12 10:33:13
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  细胞粘附实验通常分为两类,即细胞与细胞粘附和细胞与基质粘附。机体内许多细胞,如上皮细胞固定在某处发挥功能;另一些细胞,如白细胞,活跃运动,就需要不断调节细胞粘附。细胞粘附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。恶性肿瘤具有从原发瘤分离及在体内扩散的能力,提示这些细胞相互识别及粘附机制发生了改变。

  实验方法:

  用10 μg/mL的纤连蛋白(fibronectin,FN)预铺96孔板,70 μL/孔,4℃过夜后,PBS洗3遍,再用1% BSA于37℃封闭1h,PBS洗3遍。将待测XXX细胞培养至对数生长期,消化细胞,用无血清培养基悬浮细胞,调整浓度为5×105/mL分别接种于预铺FN的96孔板中,每孔5000个细胞,每组设3个复孔。37℃孵育1h后,PBS洗去未黏附的细胞。

  检测方法1:3.5%戊二醛于4℃固定0.5h,PBS洗3遍;0.1%的结晶紫染色,室温静止0.5h,PBS洗3遍,每孔加入100 μL 10%的乙酸,5~10min后用酶标仪检测595nm的吸光度值,用以表示黏附细胞的多少。

  检测方法2:按照每孔加入100μL甲醇,固定15 min每孔加入100 μL吉姆萨染液,染色15min,PBS洗去染液倒置显微镜下随机取5个随机视野计数粘附细胞数量并拍照,统计结果。

  检测方法3:MTT法或CCK-8检测细胞量。


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