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细胞周期技术总结与分享

2023-03-30 10:39:18
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  细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。由于细胞周期各时相的DNA含量不同,通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。

  技术原理

  PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期。

  实验方法

  Step1:细胞培养

  Step2:转染或药物处理

  Step3:细胞收集

  Step4:加周期试剂

  Step5:上机检测

  在施加药物后,细胞周期明显阻滞。

  技术总结

  细胞铺板时密度宜适中,视细胞贴壁与否,选择胰酶消化或直接吸取培养基。初次离心后,需倒去上清,加入生理盐水再次离心收取沉淀。以快速周期检测试剂盒为例,在加入周期试剂前需完全吸去EP管内上清,并且在1h内上机检测。

  在以上所有的操作步骤中,动作均需轻柔,避免反复吹打,形成机械损伤,而出现细胞碎片过多。同时,在细胞接种时,一定要控制所有组的细胞密度,因为细胞密度会对细胞周期状态有所影响,而导致细胞周期分布不一样。

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