资讯动态

流式细胞检测的步骤及实验原理

2023-03-31 10:40:40
|
访问量:17472

  细胞周期一般有几种检测方法,如流式检测法、BrdU(5~溴脱氧尿嘧啶核苷)掺入法及同位素标记法等,尤其是其中的流式检测法可适用于大量样品的细胞周期检测,能急速的分析单个细胞的多种特性,它是现在最经常用到的测定细胞周期的一种很有效的方法,以下就其中的流式细胞仪来进行周期分析和测试。

  流式检测的实验原理:

  1、由于细胞周期各时相的DNA含量不同,因此,可通过特异性与DNA结合染料来检测细胞内的DNA含量来测定细胞周期。

  2、流式中常用碘化丙啶(Propidium,简称PI)与DNA结合,其荧光强度与DNA含量成正比。

  流式细胞仪的实验步骤:

  1、收集细胞 取适量的对数生长期细胞接种于6cm中,在相应的条件下(如药物)处理相应时间后,倒去培养基,用胰酶适度消化细胞,离心收集细胞,弃去上清。

  2、清洗及固定细胞 用PBS清洗细胞2遍,吸净离心管残余的PBS后,加入300μL PBS重悬。

  3、洗涤细胞 次日,离心收集细胞,用移液枪吸走上清,然后用1mL PBS重悬细胞并离心清洗2~3遍。

  4、RNA酶消化和PI染色 在避光条件下,每个样品加入1避光 RNase (10mg/mL)和5和mg/m(5mg/mL)混匀后室温避光条孵育30min。

  5、上机检测 将检测样品转移到5mL的流式管后用流式细胞仪检测细胞周期,采用flowjo或modifit软件进行DNA含量分析。

  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

在线留言(即刻联系为您提供专业的解决方案) ×
留言咨询

感谢您的关注,如有需要请留言,我们会尽快和您联系。