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RAW264.7培养经验分享

2022-10-10 10:34:17
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  1.细胞背景:

  小鼠来源白血病毒诱导肿瘤细胞,属于巨噬细胞,贴壁生长。

  形态以类圆形和不规则为主,一般1~2个核,极少数有3个核,胞浆伸展时胞体较大。镜下细胞为小珍珠似的圆形椭圆形。

  2.基本培养情况:

  培养条件:10%FBS,DMEM高糖,进口gibco血清。

  传代:细胞增殖较快,70%即可传代,细胞有触角也提示需要传代,1:3--1:6传代,推荐使用皿。传代时切记不要使用胰酶,正常情况下此细胞贴壁不牢,直接吹打即可,胰酶消化会使细胞伸出触角改变形态。直接用培养基吹打,也可以用PBS,感觉无差异。

  冻存和复苏:和普通细胞无异。

  细胞生长状况:RAW264.7作为巨噬细胞有很强的吞噬能力,吞噬抗原后伸出长角,就是大家常见的伪足。同时贴壁黏附能力增强,传代时难以消化下来。

  该细胞贴壁时间短,成片生长,似小菌落般小片生长,最后连,成一片并会叠层。传代密度不易过高或者过低,过低会导致细胞生长缓慢甚至不生长,过高,细胞会长出伪足

图例

  3.关于RAW264.7分化:

  正常细胞为贴壁不牢的圆形椭圆形细胞,分化后伸出伪足,贴壁能力增强。

  避免方法:

  ①血清最好是进口的真血清。

  ②密度不要太高或者太低,尤其是需要传代时切不可拖延时间的。

  ③传代时切不可胰酶消化,直接吹打就能下来。

  ④不要污染,包括其他细胞株的污染。

  4.关于RAW264.7亚系:

  正常细胞为贴壁不牢的圆形椭圆形细胞,分化后伸出伪足,贴壁能力增强。

  避免方法:

  ①RAW264.7有多种亚系,不同亚系有个别基因表达的差异,具体可在ATCC官网查看。

  ②有的亚系,稍微一吹就下来,有的就需要1ml枪头反复吹打。

  ③根据我们培养的几种RAW细胞情况,传代不需要胰酶消化,可用培养基直接吹打。如果难以吹下,可尝试用冷PBS稍微洗一下吹打,当然也可以直接用冷PBS吹打。

  ④RAW264.7是有一些细胞会有触角的。不过,若培养液有点脏,细胞也不是特别透亮,则考虑是否有污染。RAW作为巨噬细胞系对污染很敏感。

  ⑤RAW264.7细胞系培养基使用要注意,不同亚系可能有所不同。有的只用 1640培养基,有的用高糖。所以要细胞培养前,相关信息要查阅清楚。

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