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细胞冻存方法及注意事项(实用小技巧分享)

2022-10-07 10:39:54
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  细胞培养的开始,就是复苏细胞。如何有条不紊地让细胞从沉睡中苏醒?今天就来给大家总结几个实用小技巧,快点来get!

  细胞复苏流程:

  1、将冻存的细胞从液氮罐中取出,立即放入37°C的水浴中进行融化,轻柔晃动,加速融化,直到小瓶中只剩下一小块冰,时长应控制在1min中;

  2、用70%乙醇擦拭瓶外后转移无菌操作台中,打开瓶盖前,用酒精灯火焰对瓶口进行消毒;

  3、将预加热的新鲜完全培养基滴入小瓶中。缓慢用移液枪吸取瓶中液体至15ml离心管中,加入适量浓度和体积的完全培养基,轻柔混合均匀;

  4、200 × g左右细胞悬浮液离心5-10分钟。实际的离心速度和持续时间因细胞类型而异。弃掉上清,加入新鲜完全培养基重悬细胞,并将其转移到适当的培养容器和推荐的培养环境中。

细胞解冻流程图

  细胞解冻流程图

  注意事项:

  1、液氮温度低,小心低温对人造成的伤害,在液相中储存的冷冻瓶在解冻时存在爆炸的风险,因此,取出冻存管的时候,要做好个人防护。

  2、通常细胞集中储藏在液氮中,取出时应迅速,避免温差对其他冻存细胞造成影响。

  3、复苏细胞的核心技术,简而言之就是快融,将在37°C水浴中快速解冻冷冻细胞(< 1分钟。

  4、解冻时,冻存管先放入无菌一次性PE手套中,再放入水中融化,避免污染也方便操作。

  5、用预热过的培养基慢慢稀释解冻的细胞。

  6、解冻细胞后,在培养皿中培养时,应尽量维持高密度,以提高细胞存活率。

  7、注意无菌操作,避免细胞发生污染。

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