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siRNA形式和shRNA病毒体内实验(基因干扰体内实验方法详解)

2022-03-30 10:31:38
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  之前有讲到基因干扰的体外实验常用到的几种方法和他们的特点,而体内实验和体外实验还是有些差别的。

  体内实验进行基因干扰目前接触到的主要有两种形式:siRNA形式和shRNA病毒。

  siRNA的形式应用于体内实验

  siRNA的形式应用于体内实验还需要进行相应的化学修饰,因为siRNA本身是属于RNA,也具有RNA不稳定、易降解的特点,所以对siRNA进行相应的化学修饰可以提高其稳定性和半衰期,从而更好的发挥基因干扰的效果。

  目前接触过的用于体内实验的修饰方式有:甲氧基修饰(2’-OMe)、硫代磷酸修饰、2’-氟嘧啶修饰、5’-嗅尿嘧啶修饰、胆固醇修饰等。体内实验自然要涉及到如何给药方式的问题,目前常用的是尾静脉注射和局部注射。尾静脉注射可能需要的siRNA的量会更多一些。

  用于体内实验的siRNA一般用HLPC纯化方式进行纯化,溶解建议用生理盐水,避免有内毒素等热源引起的体内免疫反应。

  用于体内实验的siRNA一般不需要转染试剂。因为转染试剂本身属于外源性的物质,可能会引起体内的免疫反应。当然有老师可能会进行体内材料相关的研究,那着重点会是材料,那自然就更不要转染试剂。

  shRNA病毒用于体内实验

  shRNA病毒应用体内实验可能主要会有两种形式,一种是动物的成瘤实验,另一种是直接用病毒注射动物进行基因干扰实验。前一种严格意义来讲病毒应该主要应用于体外,形成稳定的表达的细胞系后,将对照细胞和shRNA稳转的细胞进行体内种植,进行成瘤实验。所以这个实验只能用shRNA慢病毒进行。

  直接用病毒进行体内基因干扰实验,常用的三种病毒(慢病毒、腺病毒、腺相关病毒)都可以进行,受制于三种病毒各自的优缺点,更推荐用腺相关病毒,但它的价格也是更高的。

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