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细胞实验:细胞实验活力检测

2021-08-18 02:41:06
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  在细胞培养过程中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力。细胞活力检测在细胞培养过程中,是比不可少的一个过程,由组织中分离细胞一般要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用;复苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和复苏的效果。细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞染色,进行细胞计数。

  细胞实验培养过程中,正常细胞胞膜完整,台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞胞膜通透性增加,台盼蓝能进入细胞内而使细胞着色(蓝色)。

  细胞实验过程中,细胞活力检测操作步骤:

  1. 配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100mL,用滤纸过滤,4℃保存。使用时用PBS稀释至0.4%。

  2. 胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释(106 cells/mL)。

  3. 取少量细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合,轻轻吹打混匀,染色2~3min。

  4. 显微镜下观察,死细胞着浅蓝色并膨大,无光泽;活细胞保持正常形态,无色透明有光泽。若需计算活细胞率则将染色的细胞悬液滴入细胞计数板计数。

  活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×

  注意事项:台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数的准确性。

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