资讯动态

蛋白质纯化(包括酶)的提取方法

2022-08-21 10:39:20
|
访问量:117872

  大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。

  (1)水溶液提取法

  稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。

  一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间。

  但另一方面,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作。为了避免蛋白质提取过程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制剂(如二异丙基氟磷酸,碘乙酸等)。

  下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择:

  1.pH值

  蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。

  2.盐浓度

  稀浓度可促进蛋白质的溶,称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合,具有保护蛋白质不易变性的优点,因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐,一般以0.15摩尔。升浓度为宜。缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。

  (2)有机溶剂提取法

  一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶,不溶于水、稀盐溶液、稀酸或稀碱中,可用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂,它们具的一定的亲水性,还有较强的亲脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必须在低温下操作。

  丁醇提取法对提取一些与脂质结合紧密的蛋白质和酶特别优越,一是因为丁醇亲脂性强,特别是溶解磷脂的能力强;二是丁醇兼具亲水性,在溶解度范围内(度为10%,40度为6.6%)不会引起酶的变性失活。另外,丁醇提取法的pH及温度选择范围较广,也适用于动植物及微生物材料。


文章推荐
免疫荧光实验总结盘点
2023-03-03
免疫荧光实验是一种常用的细胞和分子生物学实验技术,用于检测蛋白质···
单细胞测序技术在遗传学和蛋白质组学的应用
2022-11-10
单细胞测序技术在通量、成本和功效方面的持续进步使得对大量单个细胞···
细胞克隆形成实验原理及实验过程(平板克隆形成、软琼脂克隆形成)
2022-07-19
细胞克隆形成实验原理细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭···
影响最终质粒产量的主要因素,质粒产量低的 11 个原因
2022-04-19
在进行质粒制备时,获得良好的质粒产量至关重要。那么什么是好的收益···
重大突破,IF12.1分!中科院亚热带所李凤娜团队在小鼠粪便中发现了预防结肠炎的有效物质!
2024-12-06
众所周知,我国肠炎发病率较高,通常是由感染、药物反应、食物不耐受···
组学都有哪些?这14种快速了解下!
2024-12-04
在生物医学领域中,有多个分支的组学,下面让我们一起来快速了解下以···
中科院1区IF10.6分!“外泌体+水凝胶”的国自然王炸组合,揭秘骨再生机制!不愧是顶刊思路,赶紧学习一波!
2024-12-02
众所周知,骨是人体重要的器官,承载着支撑运动,保护脏器等功能。在···
“铁积累+纤维化+细胞衰老”的王炸组合,不愧是Nature子刊的研究思路!轻松拿下中科院1区IF18.9分!
2024-11-29
“铁代谢”和“衰老”可以说是两个永不过时的研究热点,当然也是近几···
  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

在线留言(即刻联系为您提供专业的解决方案) ×
留言咨询

感谢您的关注,如有需要请留言,我们会尽快和您联系!