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蛋白提取纯化有什么注意事项(需要牢记)

2022-08-20 10:41:30
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  在进行任何一种蛋白质纯化的时候,都要时刻注意维护它的稳定性,保护它的活性,有一些通用的注意事项需要牢记,它们包括:

  1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。

  2、不要太稀,蛋白浓度维持在μg/mL~mg/mL。

  3、合适的pH,除非是进行聚焦层析,所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同,防止蛋白质的沉淀。

  4、使用蛋白酶抑制剂,防止蛋白酶对目标蛋白的降解;在纯化细胞中的蛋白质时,加入DNA酶,降解DNA,防止DNA对蛋白的污染。

  5、避免样品反复冻融和剧烈搅动,以防蛋白质的变性。

  6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。

  7、在缓冲溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫苏糖醇)(或β-巯基乙醇),防止蛋白质的氧化。

  8、加1~10mmol/LEDTA金属螯合剂,防止重金属对目标蛋白的破坏。

  9、使用灭菌溶液,防止微生物生长。


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