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细胞培养的基本流程(复苏、传代、冻存3个基本流程)

发布时间:2022-08-09 10:36:19 阅读:12252次 来源:百趣生物Biotree

  细胞培养也叫细胞克隆术。是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定的营养条件等),使细胞生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。下面就和大家来聊一聊细胞培养的基本流程。

  细胞培养主要涉及细胞的复苏、传代、冻存3个基本流程。其次才是相关的细胞实验(细胞转染、增殖、凋亡、周期、免疫荧光等等),要知道良好的细胞状态才是做好实验的基础。

  01细胞复苏

  细胞从哪里来呢?一般细胞株的话从专业的细胞库购买就可以。原代细胞需要从组织进行分离,且原代细胞分离后传代次数非常有限,仅仅几代状态就开始下滑。细胞复苏之前的准备工作至关重要。培养箱、超净台、枪头进行消毒、灭菌处理(小趣使用的是一款可以高温灭菌的培养箱,轻松了很多)。针对细胞准备特定的培养基以及高品质的胎牛血清、双抗;此外就是细胞的“家”了!大家一定注意可不能使用劣质的培养皿/瓶,否则贴壁类的细胞不贴壁。细胞复苏的基本流程已给大家梳理好了。

图例

  02细胞传代

  细胞复苏工作完成后,就静待细胞慢慢成长吧,细胞在生长的过程中会消耗营养,产生代谢物,培养液pH会发生变化。因此,建议48h左右进行换液,当培养板里的细胞密度达到90%左右就可以准备传代了。

  贴壁细胞常用胰酶消化法。先弃掉上清,用PBS漂洗一次后加入适量的胰酶消化液,刚好覆盖细胞即可。不同细胞的消化时间不同,需要去摸索,第一次操作,可在镜下多观察几次,当细胞与细胞之间间隙明显,形态有变圆的趋势时最理想(FTC133消化2 min、Hcclm3消化5min)。胰酶消化完成,加入培养基中和胰酶,轻轻吹打收集细胞至离心管,离心去除上清。再次加入新鲜培养基重悬细胞,按照1:1-1:6的比例分到多个培养皿中,补充培养液后放入培养箱即可。

图例

  03细胞冻存

  细胞冻存是重中之重,新的细胞一定要进行冻存保种,防止后续细胞传代次数过多、状态差、污染等问题出现时无细胞可用。细胞冻存与传代步骤有相同之处,不同的是消化收集细胞后使用冻存液(90%血清+10%DMSO)重悬细胞,然后分装进冻存管中,转移至冻存盒,-80℃过夜后即可转入液氮长期保存。

图例

  细胞的培养过程其实也没有你想象的那么难,把握好细节,离成功就不远了。

  1.无菌意识一定要强。试剂、耗材必须无菌,操作前、后超净台灭菌处理

  2.根据不同细胞特性使用不同的培养液,不建议与别人共用同一瓶试剂

  3.培养多种细胞,操作时避免交叉污染

  4.细胞操作时、打开培养箱取、放细胞时尽可能不要说话

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1463.html

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