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原代细胞实验如何检测

2022-06-30 10:26:03
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  (一)包涵体的检测。

  1. 血片及白细胞涂片制备

  采集的抗凝血标本尽快用血球层推血片,待干燥后冷丙酮固定10min;或提取抗凝血中的白细胞并进行涂片,待干燥后冷丙酮固定10min。

  2. 染色

  通常采用瑞氏(Wright)染色法、姬氏(Giemsa)染色法及瑞-姬混合染色法。有条件的实验室,可使用美国CDC推荐的染色方法。

  3. 染液配置方法

  (1)瑞-姬染液:取瑞氏染料和姬氏染料各0.5 g,以甲醇研溶,加甲醇500ml保存,每天摇匀1次,1周后可使用。

  (2)改良Mc Donald法瑞-姬染色剂:75 ml甘油(分析纯)中加入磷酸盐缓冲液(Na2HPO4 1g和KH2PO4 2g),以4 ml蒸馏水溶解,37 ℃水浴24 h溶解混匀,用滤纸过滤,保存于密封的棕色瓶中备用。上述甘油缓冲液1.5 ml加瑞-姬染色剂50 ml,混匀后备用。

  4. 染色步骤

  血推片或白细胞涂片分别以两种染色剂染色2 min,再加蒸馏水作用5 min,用自来水冲洗。

  5. 结果观察

  中性粒细胞中可见桑葚状包涵体(见图1),并注意保存相关标本,以便进行复核。

  (二)血清学检测。

  常用血清学方法为间接免疫荧光(IFA)法。采集急性期(发热初期,一般发病1周内)与恢复期(至少间隔2-3周)双份血清。如恢复期血清抗体检测阴性,应建议医生采集第3份血液样本(间隔2-4周)。

  1. 试剂

  使用推荐的、经过ISO质量认证的产品。

  2. 方法及操作按说明书进行。

  3. 结果解释

  IFA检测结果解释按说明书进行。

  如果同时检测双份血清,IgG抗体4倍升高,则结果强烈支持原代细胞无形体感染。如果急性期抗体升高,而恢复期没有升高或轻微升高,则应采集第3份血液样本(间隔2-4周)进行进一步检测。

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