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小鼠原代细胞实验遇到的问题及解决方法(有关实验操作)

发布时间:2022-06-30 10:24:23 阅读:11762次 来源:百度学术

  小鼠原代细胞实验遇到的问题及解决方法

  1 选择试剂选择质量优异的检测试剂,严峻按照试剂阐明书进行操作,操作前将elisa试剂盒在室温下平衡30-60分钟。

  2 加样可能原因:1)血清或血浆标本分别欠好即进行加样;2)手工操作中,加样板过多构成加样后放入孵箱前等候时间过长;3)加完标本再加酶试剂时酶溅起孔外。解决办法:1)标本为血清:将血液先天然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:有必要运用含抗凝剂的血液标本搜集管,采血后有必要当即倒置采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。2)加样后及时放入孵箱。3)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。4)如果选用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。5)标本较多时,请分批操作。

  3 孵育可能原因:1)孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸腾,吸附于孔壁,难于清洗彻底;2)孵育时间人为延伸,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。解决办法:1)贴封片或加盖;2)按阐明进程严峻控制操作时间。

  4 洗板可能原因:1)选用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。2)选用半自动洗板机洗板时,洗液量缺少,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不彻底;洗板不畅,导致洗板效果差。3)反应板过多构成洗板等候时间长。解决办法:1)保证洗液注满各孔,洗板针疏通,洗完板后在吸水纸上轻轻拍干;2)合理安排,或多用几台洗板机。

  5 显色可能原因:1显色剂制造后放置时间过长或运用过期显色剂;2)加显色剂时溅起孔外构成液体回流。解决办法:1)显色剂尽量在临用前制造,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用;2)加样时坚持显色剂不外流;3)A、B液应避免接触金属器械。

  6 中止可能原因如加中止液时发作较多气泡,导致假阳性增加。所以在加中止液时应避免发作气泡。

  7 读板如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。

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