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原代细胞培养方法,原代细胞和细胞株到底该怎么选择呢?

2022-06-20 10:20:40
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  很多老师在设计科研实验的时候都会很迷茫,到底用什么细胞好? 越来越多的老师开始倾向于原代细胞的科研实验,在设计实验中,原代细胞和细胞株到底该怎么选择呢?

  原代细胞的定义:

  原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。但实际上,我们通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。

  原代细胞因为可以模拟机体的功能,主要用于:生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究

  下面我们整理了一些培养原代细胞的小知识:

  解冻

  原代细胞对解冻过程非常敏感,因此将小瓶置于37℃水浴锅中,保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶,并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪,以便可以立即用于接种细胞,并置于培养箱中,我们在使用cell systems的原代视网膜内皮细胞时,复苏的时候没有去离心,第二天换个液就可以。

  传代

  原代细胞有间隙抑制接触不良反应,所以细胞不能到达100%的密度的时候传代,一般最有效的建议观察细胞的生长周期,Cell Systems的原代细胞在细胞密度达到85%左右的时候传代最佳,当生长至100%汇合时,它就会衰老。记住,所有的原代细胞不是100%纯,因此我们要尽量减少污染细胞的生长。当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶,也可以尝试下cellsystems的整体消化套装哦(品牌:cell systems,货号:4Z0-800)并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。

  冻存

  通常我们不推荐重新冻存原代细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

  与细胞系不同,原代细胞增殖有限,我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移,如果你正在使用一个增殖困难的细胞类型,你应该密切监测细胞形态,因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移,大量生长从而成为主要细胞。

  正常的原代细胞培养,在无污染的情况下,建议培养基中不加抗体,抗体会影响细胞的某些基因变异从而导致实验数据有差异,所以cell systems的细胞在分离提取时就考虑到这点,他们不会采用任何抗体去分离和纯化的同时,通过酶消化或者离心洗涤的方法让细胞达到95%以上的纯度,这样得到的实验数据更为准确。

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