您的位置:首页>>公司动态>>行业资讯

小鼠肝癌细胞腹水传代实验步骤

发布时间:2022-05-30 10:29:41 阅读:15242次 来源:普诺赛生物

  H22(小鼠肝癌细胞)分离自小鼠腹水,由大连医科学院建立。在实验研究中,常将H22细胞接种于小鼠皮下,建立异位移植模型,广泛用于抗肿瘤药物药效学初步筛选。

  基础信息

  生长特性:

  悬浮细胞

  细胞形态:

  淋巴母细胞样

  生长培养基:

  RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

  推荐传代比例:

  3×10^5-5×10^5cells/mL

  推荐换液频率:

  2~3次/周

  冻存液:

  55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

  培养条件:

  气相:空气,95%;CO2,5%

  温度:37℃

  腹水传代培养

  了解完细胞的基础信息,我们就可以着手准备细胞培养了。普诺赛已经为大家总结好了详细的腹水传代步骤,希望能对大家有所帮助!

  1

  H22体外培养至合适密度后,离心(1200r/min,3min)收集细胞,用PBS重悬备用;

  2

  取0.2mL培养好的细胞计数(细胞密度为1*10^7/mL)后,腹腔注射至小鼠腹腔;

  3

  饲养5-6天,小鼠腹水可收集(4-8mL);

  4

  采用无菌抽取或解剖收集腹水后,用PBS稀释2倍后离心(1200r/min,3min),去上清,重复洗涤过程1-2次,加入10mLPBS重悬制备成细胞悬液备用;

  5

  取50mL离心管加入10mL小鼠外周血淋巴细胞分离液,上层加入10mL细胞悬液,离心收集沉淀(2000r/min,10min),重复2-3次;

  6

  将收集的沉淀用1640培养基重悬,接种于T175培养瓶中,接种密度为4*10^5 /mL,放置培养箱培养8-12h;

  7

  收集细胞悬液离心(1200r/min,3min),用程序冻存液将细胞冻存,冻存密度为10^7/mL

  注意事项

  掌握以上培养步骤就一定可以培养好细胞吗?你还需要掌握以下这些注意事项 :

  1

  新手可以选择处死小鼠,然后先用注射器吸出一些细胞,再剪开腹腔,用枪吸出剩下的;熟练了可以不处死小鼠,直接注射器插进去吸,小鼠还能重复接种;

  2

  注意不要戳破内脏,否则容易造成细胞交叉污染;

  3

  小鼠饲养时间控制在5天为佳。时间过长,小鼠会死亡或收集的腹水中红细胞含量过高;

  4

  复苏之后会有死细胞,但不影响正常腹水的产生;

  5

  H22体外培养增殖几代就需要腹水培养一次,否则细胞状态会急速变差,碎片增多。做实验需提前扩增至所需的细胞量然后冻存起来,长期培养需5代内腹水培养一次;

  6

  中间每一次传代可以先离心,PBS或生理盐水重悬后打给下一只;

  7

  收集腹水红细胞过多时,可以用红细胞裂解液去除;

  8

  用分离液分离细胞时,可多次分离筛选,保证细胞的纯度;

  9

  冻存细胞最好分离出来后培养8个小时左右再冻存,可以有效去除可能没有筛出去的血红细胞,还可以让细胞的状态调整至最佳;

  10

  细胞活力不一样、接种细胞量不一样,腹水长出的时间就不一样。接种是否成功可以通过观察老鼠的状态来确定,接了腹水的老鼠活动力会变弱。

  常见问题及解答

  01

  H22腹水传代可以用哪些小鼠?

  可以用balb/c小鼠、Km小鼠等,体重在20g左右。

  02

  细胞收货有哪些注意事项?

  到货后,请将细胞瓶竖立着静置2~4h,然后把瓶中培养基上面部分培养基小心吸出,留底部细胞和3mL左右培养基在原瓶。吸出的细胞离心收集细胞沉淀,离心转速1200转3分钟。

  03

  为什么刚到货的H22细胞会出现细胞聚团?

  悬浮细胞发货时密度不能太低,因路上运输,状态不稳定,刚到货时可能会出现聚团的情况。待稳定培养几天,聚团会消失,需要注意培养时少动细胞,以免损伤细胞。


本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1205.html

注释:[本文仅供阅读]不代表企业及作者的立场,如侵权请联系删除,欢迎分享本文,转载请保留出处!

推荐服务

  • 分子实验

    分子实验平台为广大科研工作提供蛋白、RNA和DNA分子类分析及检测服务···

  • 细胞实验

    细胞实验平台为广大科研工作者提供原代细胞提取、鉴定和培养相关服务···

  • 病理实验

    动物实验平台为广大科研工作者提供动物寄养、疾病模型构建和体内验证···

  • 动物实验

    动物实验平台为广大科研工作者提供科研成果向产品转化的服务,转化方···

  • 精准医疗

    精准医疗平台为癌症患者提供肿瘤移植动物体内服务,模拟患者癌症发展···