A. 溶液与试剂

　　碳酸盐缓冲液： 15 mM Na2CO3、35 mM NaHCO3、0.2 g/L NaN3 (pH 9.6)。将 1 μM 合成肽溶于碳酸盐缓冲液中。

　　10 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)：为了配制 1 L，添加 80 g 氯化钠 (NaCl)、2 g 氯化钾 (KCl)、14.4g 磷酸氢二钠 (Na2HPO4) 和 2.4g 磷酸二氢钾 (KH2PO4) 至 1 L dH2O。调节 pH 至 7.4。

　　洗涤缓冲液：含有 0.05% Tween® 20 的 1 X PBS (PBST)

　　封闭缓冲液：PBST 中 10 mg/ml 牛血清白蛋白 (BSA)

　　抗体稀释缓冲液： 3% BSA 稀释于 PBST 中

　　DELFIA® 铕标记的针对小鼠一抗的 Anti-mouse IgG 或针对兔一抗的 Anti-rabbit IgG (PerkinElmer Life Sciences #AD0124)。

　　DELFIA® 增强溶液 (PerkinElmer Life Sciences #1244-105)

　　B. 实验步骤

　　将 100μl 1 μM 稀释于碳酸盐缓冲液中的合成肽，加入 96 孔微量滴定板的各孔，在 4°C 孵育 过夜或37°C 孵育 2-6 小时进行包被。如果肽不结合或不吸附，可尝试pH在4–8 内的其他缓冲液。

　　用 200 μl/孔的洗涤缓冲液洗涤平板 3 次。

　　用 200 μl/孔的封闭缓冲液在 37 °C 下封闭平板 1 小时。将洗涤缓冲液洗涤平板 3 次。（如果需要，可以持续 1-2 个月将平板保持在 4°C ）

　　用抗体稀释缓冲液配制适宜稀释度的一抗 。向每个孔中添加 100μl，并在 37°C 孵育 1 小时。

　　用洗涤缓冲液洗涤 3 次。

　　添加稀释于 100μl/孔抗体稀释缓冲液中的 67ng/孔 DELFIA 铕标记 Anti-mouse IgG。在 37°C 孵育 30 分钟。

　　用洗涤缓冲液洗涤 5 次。

　　添加 100μl 增强溶液并在 37°C 孵育 15 分钟。用适宜的时间分辨平板读数仪在 615 nm 读取平板读数。