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培养K7M2-WT细胞

发布时间:2022-04-08 11:09:28 阅读:14242次 来源:普诺赛

  K7M2-WT(小鼠骨肉瘤成骨细胞)在Balb/c小鼠中形成肿瘤,在超过90%的接种小鼠中自发转移到肺部。K7M2-WT细胞抗原表达:Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、饰胶蛋白聚糖、绒毛蛋白。此外,骨唾液酸蛋白、二聚糖、饰胶蛋白聚糖和骨调素的表达显示K7M2-WT细胞骨家族细胞特性。

  基础信息

图例

  K7M2-WT细胞基础信息细胞复苏

  01 将水浴锅预热至37℃,准备好干净的一次性手套,将细胞从液氮罐中取出,放入一次性手套中,迅速没入水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以一分钟内全部溶解为宜

  02 将解冻的细胞放入装有新鲜培养基的离心管中,打开盖子前,用75%酒精擦拭冻存管外部;

  03 1200rpm离心3分钟左右,离心完毕后去掉上清;

  04 取适量与细胞配套的完全培养基重悬细胞,并接入到无菌容器中,补充一定量培养基,再放入培养箱培养。

  细胞冻存

  01 配置冻存液。由于DMSO配置时会发热,一定要等冻存液冷却后再使用,避免灼伤细胞;

  02 细胞消化好后用新鲜培养基终止,制成细胞悬液,1200rpm离心3分钟左右,尽量吸尽上清;

  03 加入配置好的冻存液,调节浓度至大约1×106个细胞/mL,分装到细胞冻存管;

  04 分装好的冻存液转入程序冻存盒,放入-80℃冰箱过夜;

  05 从-80℃冰箱取出冻存管,并迅速转移到液氮长期保存。

  细胞传代

  1 将培养基吸出丢弃,加入2mL PBS润洗;

  2 吸出PBS丢弃,加入2mL胰酶润洗;

  3 放入培养箱消化2-3分钟,轻拍培养皿侧壁,看到细胞脱壁且聚集的细胞团松散开后,加入2mL完全培养基终止消化;

  4 将细胞轻柔吹打,使细胞混匀为悬浮液,根据需求进行接种。

  小贴士

  细胞密度不能太低;

  润洗时要注意将所有细胞都浸润到。

图例

  K7M2-WT细胞正常生长

图例

  K7M2-WT细胞正常生长

培养注意事项

  1 该细胞对外界刺激较为敏感,建议使用新鲜的DMEM高糖培养基,培养基出现发紫现象时不建议继续使用,且及时更换新鲜培养基;

  2 该细胞贴壁不牢,会有部分细胞悬浮。换液时勿用PBS进行冲洗,悬浮细胞过多时可离心收集再放回原培养瓶;

  3 该细胞传代时请注意消化程度,请勿消化过度


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