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分子实验-免疫组织化学 (IHC) 双染色

2022-01-12 10:26:53
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  免疫组化双染色技术可用于可视化两种或多种抗原,并分析它们的定位、形态和功能之间的关系。

  连续切片双重染色

  连续切片染色可能是可视化两种抗原的最简单方法。如名称所示,它分别在相邻的两个切片上染色两种抗原。因此,它有效地防止了干扰和假阳性结果。但是,相邻的两个部分可能在某些方面有所不同,例如像元大小、类型和数量。需要重复实验来减小标准偏差。

  免疫荧光双染

免疫荧光双染

  直接染色:

  将切片与分别与两种荧光染料(例如 FITC 和 TRITC)结合的两种一抗混合孵育

  或者,用两种一抗依次孵育切片;

  显微处理时应设置两个波长的激发光,并通过图像软件合成合并图像。

  间接染色:

  在间接免疫荧光双染色中,一抗不含荧光染料。用一种一抗和相应的二抗孵育切片,然后用另一种孵育。处理显微镜并通过图像软件合并图片。

  免疫酶学双染(推荐双酶):

免疫酶学双染

  用两种一抗孵育切片;

  用与两种不同酶(例如 HRP、AKP)或抗 HRP(PAP 复合物)、抗 AKP(APAAP 复合物)偶联的相应二抗孵育切片。

  注意:*HRP 抗体应在 AKP 之前孵育。

  *进行预实验以防止交联反应。


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