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分子实验-免疫细胞化学染色(ICC染色)

发布时间:2022-01-12 10:30:36 阅读:17532次 来源:百度学术

  免疫化学是通过对抗原特异的抗体识别组织学组织切片或细胞学制剂中的某种抗原。然后通过适当的酶促或荧光检测系统在显微镜下观察一抗(以及因此目标抗原)的定位。有许多可用的技术,具体取决于复杂性和所需的灵敏度程度。

  设置场景,免疫化学染色实验常用的标本基本有五种:

  • 石蜡包埋的组织切片。

  • 冷冻组织切片。

  • 自由浮动的组织切片。

  • 细胞学标本作为传统涂片。

  • 细胞学标本作为单层制剂(包括细胞离心涂片制剂)。

  1.1 石蜡包埋切片

  石蜡包埋切片可能是最常见的免疫化学染色标本类型。组织块从合适的大体标本中获取,固定以保持形态,然后加工成石蜡,以便在切片期间提供组织支持。切片以约 4 μm 的厚度切割并漂浮在水浴中,然后被拾取到玻璃显微镜载玻片上。然后将切片在 60°C 左右干燥,以增加它们对载玻片的附着力,并帮助熨平在切片或漂浮过程中产生的任何折痕。在进行免疫化学染色之前,必须对切片进行脱蜡并进行任何必要的预处理。

  1.2 冷冻组织切片

  当需要快速诊断或需要观察对醛固定和组织处理敏感的某些抗原时,往往会使用冷冻组织切片。通常,冷冻切片比石蜡切片可以更好地保存抗原,并且由于没有过度的固定和处理机制而受到一些研究人员的青睐,从而使抗原处于更“天然”的形式。雌激素受体标记物过去属于这一类,直到开发出检测甲醛固定、石蜡包埋切片中存在的表位的抗体。如果制备得当,冷冻切片中的组织形态具有相当高的质量,但似乎无法与石蜡切片相比,这可能是由于石蜡切片的固定程度较高。冷冻组织的切片技术要求更高,尤其是在组织钙化或脂质含量高的情况下。为准备冷冻切片,将新鲜组织浸入合适的冷冻剂(例如液氮)中,一旦冷冻,将其放置在低温恒温器夹头上并嵌入合适的包埋介质中,例如 OCT(最佳切割温度)。嵌入介质凝固后,通过冷冻获得 4 μm 切片并安装在玻璃显微镜载玻片上。

  1.3 自由浮动部分

  由于可以获得结果的速度,自由浮动切片通常受到敏感神经抗原研究人员的青睐。

  在用基于醛的固定剂进行心脏灌注后,从大体标本中取出组织并切片,通常厚度约为 50 μm。然后将切片漂浮到水浴上并进行原位免疫化学染色。样本的厚度允许执行此操作,但必须特别注意洗涤步骤,以减少由于抗体“被困”在厚组织中而导致的非特异性背景染色。

  1.4 细胞学标本

  细胞学标本通常采用传统涂片的形式或通过自动化技术(例如 Thinprep)获得的单层或在玻璃盖玻片上生长。非特异性背景染色可能是细胞学标本的一个问题,因为细胞的聚集可以起到“捕获”抗体的作用。然而,这种伪影的强度往往低于真阳性染色。

  1.5 可重复和准确的结果

  必须强调的是,每一个免疫化学实验室的目标都是每次都获得可重复和准确的结果。还有许多其他参数对免疫化学染色的结果有显着影响。对免疫化学染色实验中使用的试剂和方案进行审查是很常见的,例如试剂浓度、孵育时间和封闭步骤;但实际上,从标本采集点开始,结果就已被预先确定。与染色程序本身一样,在进行免疫化学染色之前,应同样注意标本的处理方式。

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