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分子生物学实验步骤(分子实验包括哪些方面)

2021-12-22 10:18:30
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  分子实验有哪些?可以说是非常多的,PCR 分子克隆 核酸电泳、琼脂糖凝胶电泳 测序 DNA,RNA 提取 转化外源DNA 体外转录、逆转录 cDNA文库构建 原位杂交、酵母双杂交、差减杂交、扣除杂交 蓝白斑筛选、抗生素筛选 基因工程技术大部分都是依据分子生物学原理设计出来的。

  细菌的活化及培养

  1.将实验室用到的烧杯、锥形瓶、培养皿等实验器皿用超声机超声20min,然后用自来水冲洗,再用蒸馏水冲洗干净,放入烘箱中烘干。

  按照培养基成分配置液体培养基,分别调好pH值后,然后进行灭菌30min。

  牛肉膏蛋白胨培养基配方

配方

  接种:在超净工作台中,取1 mL的菌种加入液体培养基中,混匀,37℃恒温振荡培养12h。

  2.菌种的保存(采用甘油保藏法)

  先取800uL的菌悬液于1.5mL的无菌离心管中,再加入200uL的灭菌甘油,用封口膜将离心管口封号,以上操作均在超净工作台中完成,然后将装有甘油和菌悬液的混合液在漩涡震荡以上混匀,保存至-78℃。

  细菌DNA的提取

  采用TIANamp Bacteria DNA kit试剂盒对单增李斯特菌进行基因组DNA抽提。

  操作步骤如下:

  1)取细菌培养液1ml,1000rpm离心一分钟,尽量吸净上清。

  2)向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA,振荡至菌体彻底悬浮。

  注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第二步,加入溶菌酶进行破壁处理,具体方法为:加入180μl缓冲液(110μl TE缓冲液,70μl溶菌酶),37℃处理30min以上。

  3)向管中加入20μl蛋白酶K溶液,混匀。

  4)加入220μl缓冲液GB(改良磷酸盐缓冲液),振荡15s,70℃放置10min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

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