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细胞实验外包-如何提取外泌体(细胞外泌体提取)

2021-11-30 10:16:25
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  外泌体(exosome)是是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。从细胞中提取外泌体后可以通过透射电镜来分析exosome的大小、形态等,再经过Western Blot可以分析特定蛋白在exosome中的表达情况。外泌体中的蛋白、RNA和脂肪成分特异,并且携带了一些重要的信号分子,其在多种疾病的早期诊断中发挥着重要的作用。

  如何提取外泌体?

  外泌体的提取方法有很多,例如超速离心法、密度梯度离心、超滤离心、PEG-base沉淀法、磁珠免疫法和试剂盒提取。实验室常用的提取方法是如下两种:

  1、超速离心法(差速离心)

  超离法是常用的外泌体纯化手段,采用低速离心、高速离心交替进行(如图所示),可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受欢迎,但过程比较费时,且回收率不稳定(可能与转子类型有关),纯度也受到质疑;此外,重复离心操作还有可能对囊泡造成损害,从而降低其质量。

外泌体提取

  2、试剂盒提取

  近几年来,市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒,有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分,有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化,也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。这些试剂盒不需要特殊设备,随着产品不断更新换代,提取效率和纯化效果逐渐提高,因而逐渐取代超速离心法并推广开来。有些试剂盒操作简便,不用超速离心,同时可获得高纯度和高回收率的外泌体。

  外泌体粒径分析、浓度检测

  外泌体粒径分析方法为纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析,结合 Stockes-Einstein 方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NT A技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。相较于其他表征方式,NT A技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。

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