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细胞实验外包:细胞复苏操作步骤和注意事项!

发布时间:2021-10-29 10:02:23 阅读:14012次 来源:百度学术

  细胞复苏和冻存讲究“慢冻快溶”,复苏时一定要将冻存在液氮或-80℃中凝固的细胞冻存液快速融化至37℃,使胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

  细胞复苏的操作步骤

  复苏准备

  ●打开水浴锅加热至37℃。

  ● 超净台上放好离心管(一般15ml的),细胞培养瓶,移液管,紫外灭菌至少20至30分钟,吹风5至10分钟除去臭氧。

  ● 37℃预热好要复苏细胞的培养液,也可以不用预热培养液,根据细胞情况选择。

细胞复苏实验

  ●向离心管中加约5至10ml培养液,从液氮罐或-80℃中取出冻存细胞,立即将冻存管放入37℃水浴中并轻轻摇动,待融化后(约2min即可)立即将解冻的细胞转移至含培养液的离心管中,800-1000rpm下离心5min,弃上清,加适量完全培养液轻轻吹打重悬细胞后转移至细胞培养瓶中,轻晃使瓶底液体分散均匀,标好细胞名称、代数、复苏日期,显微镜下观察后放入37℃,5%CO2培养箱中。一般贴壁细胞过夜即可贴壁,换液和传代时间根据不同细胞生长情况而定。

  细胞复苏注意事项:

  ● 复苏时动作要快,尽量减少胞内形成冰晶,影响复苏后细胞活率。

  ●  融化时尽量不要碰到管口,以免容易造成污染。

  ● 若一次性需要复苏细胞很多,可以分批水浴解冻,防止传热不佳使得细胞融化时间延长。

  ●若需要同时复苏好几种细胞,提前在离心管和培养瓶上做好标记,或记住自己摆放的位置,不要弄混乱。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/459.html

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