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细胞实验外包:细胞冻存注意事项「实验原理及步骤」

2021-10-30 10:02:42
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  现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,特别是在医药领域的发展,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。

  细胞冻存注意事项

  ●程序降温盒有无需有毒异丙醇填充的,有利于实验人员身体健康。

  ●DMSO有毒且皮肤会吸收,做好防护措施。DMSO本身不长菌,不需要做灭菌处理。

  ●由-80℃转至液氮时迅速,避免温度上升影响细胞活性。

  ●每个冻存管不要加入体积太多,以免冻存时凝固体积膨胀,撑开冻存管,且在下次复苏时,融化较慢,导致复苏后细胞存活率不高。

细胞冻存注意事项

  细胞冻存实验原理及步骤

  冻存的细胞要处在指数生长期。悬浮细胞和贴壁细胞经离心后用冻存液重悬,计数,冻存的细胞密度一般3*106-1*107 cells/ml,最好不少于1*106 cells/ml,否则复苏后难以养起来,将重悬计数后的细胞悬液以1-1.5ml快速分装至各冻存管中,迅速拧紧盖子,放入梯度冻存盒然后置于-80℃过夜,也可以先4℃放置30分钟,再-20℃放置1-2小时,最后-80℃过夜(16-18小时),若梯度冻存盒不够或无冻存盒,可以将冻存管置于泡沫盒中,用棉花包起来,棉花厚度约1cm,置于-80℃过夜,第二天取出-80℃细胞存放至液氮罐中,并在记录好存放位置信息。

  冻存准备

  ●配制好冻存液。一般冻存液为培养液,血清,DMSO按照7:2:1的比例配制,也可以血清和DMSO按照9:1配制,不管哪种冻存液配制,血清多多益善,但DMSO都不可以多,以免对细胞造成损伤。

  ●准备好冻存管,标上细胞名称,代次,冻存批号,冻存日期。

  ●准备好细胞程序降温盒或冻存用的材料,程序降温盒放置室温后使用。


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