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精准医疗:关于慢病毒包装系统(简介及应用)

2021-09-06 01:55:35
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  给大家分享慢病毒包装系统的简介及应用,后续的话会再专门针对慢病毒包装的实验步骤及注意事项给大家分享一下。

  一、慢病毒包装系统简介

  慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1(人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。

  二、慢病毒包装原理

  慢病毒表达载体(转移载体)包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装shRNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。

  下图用的是三质粒慢病毒包装系统。

三质粒慢病毒包装系统

  三、慢病毒包装系统的应用

  1. 对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加;

  2. 进行稳转细胞株的筛选;

  3. 为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液;在细胞相关的实验操作中,对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞,通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率,以达到目的基因的高效瞬时表达。

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